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angy7
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7 Messaggi

Inserito il - 30 maggio 2011 : 11:45:52  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di angy7 Invia a angy7 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao a tutti qualcuno può aiutarmi che ho problemi in lab. riguardo al fatto che ultimamente ho avuto lastre con assenza di segnale...
quale potrebbe essere il problema??
sono disperata...help me!!

Daria85
Utente

aplisia



678 Messaggi

Inserito il - 30 maggio 2011 : 12:28:18  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Daria85 Invia a Daria85 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
potrebbe esser partito il 2ario o l ecl...
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Ely86
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Città: milano


100 Messaggi

Inserito il - 30 maggio 2011 : 16:20:05  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Ely86 Invia a Ely86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Non mi è mai capitato a volte però mi succede di avere tutta la lasta a puntini credevo di sbagliare qlc nel procedimento ed invece era la mebrana di scarsa qualità che avevo usato/comprato!!
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angy7
Nuovo Arrivato



7 Messaggi

Inserito il - 30 maggio 2011 : 17:14:04  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di angy7 Invia a angy7 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
la membrana è quella che ho sempre usato ed altre volte mi dava un buon segnale, anche L'ECl e anticorpo 2 sono nuovi..
L'unica cosa che ho cambiato rispetto alle volte precedenti è che agito ogni volta il campione con il vortex prima di caricarlo nel gel, e siccome ho caricato lo stesso campione in 12 pozzetti differenti ogni volta lo agitavo nello stesso modo...
potrebbe aver creato problemi questo? mi sembra strano..
Ho notato che durante la corsa nel gel avevo delle bande piuttosto irregolari rispetto al solito, molto allungate, come dei filamenti..cosa potrebbe aver creato ciò??
grazie tante..
help..help..
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giulella
Nuovo Arrivato



38 Messaggi

Inserito il - 31 maggio 2011 : 09:15:35  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di giulella Invia a giulella un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Hai provato a colorare con il Ponceau la membrana?
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angy7
Nuovo Arrivato



7 Messaggi

Inserito il - 31 maggio 2011 : 12:43:04  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di angy7 Invia a angy7 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
non usiamo fare così qui.. così mi hanno insegnato...
ormai la membrana è stata buttata...
qualcuno ha altre soluzioni al problema?
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_pietro_
Nuovo Arrivato

Città: Lund


104 Messaggi

Inserito il - 08 giugno 2011 : 15:06:17  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di _pietro_ Invia a _pietro_ un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao. Rispondo tardi, magari avrai gia' risolto il problema, ma rispondo.

Partiamo dal presupposto, magari anche sbagliato, che tu nel tuo campione le proteine ce le hai e anche integre (altrimenti, cambia i campioni perche' non sei la prima ne' l'ultima a cui si deteriorano).

Quindi, andando in ordine, il primo passo e' proprio quello di controllare che i tuoi campioni siano OK, come? Un bel silver staining su gel o una qualsiasi altra colorazione su gel.

Se il problema non e' qui allora devi colorare la membrana, per verificare che il processo di blotting sia avvenuto correttamente.

Se anche qui il problema non si evidenzia allora spostati sugli anticorpi, provane diversi, magari anche 2 contemporaneamente. Io tendenzialmente escludo che il problema sia l'ECL, nella stragrande maggioranza dei casi il problema non sta li' (a meno che non lo hai dimenticato nell'autoclave e poi c'hai pucciato i savoiardi, non dovrebbe dare grossi problemi).

Fa sapere se risolvi e soprattutto come, ok?
In bocca al lupo
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