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 Dna che scompare...
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cin
Utente Junior

ptero
Prov.: Padova
Cittā: Padova


558 Messaggi

Inserito il - 13 maggio 2013 : 15:42:53  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di cin Invia a cin un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti,vi č mai capitato di avere del DNA estratto con una metodica che ad un certo punto scompare?
Parto dall'inizio.
Normale routine: campioni di sangue intero con sodio citrato o edta, estrazione di DNA con una metodica ( chiamiamola A) su cui vengono effettuati dei dosaggi con il TAQMAN con discriminazione allelica. Ad un certo momento č stata cambiata la metodica di estrazione ( chiamiamola B) e per un puro caso ci siamo accorti che i campioni, nel tempo, nell'arco di uno o due mesi si degradavano, o meglio le curve di amplificazione scomparivano e quindi abbiamo dedotto che si degradava in qualche modo il DNA.
Abbiamo cercato di dargli una spiegazione verificando le seguenti possibili cause: anticoagulante, tipologia di plastiche diverse, sterilizzazione delle vials, Taqman, tipologia di dosaggio. Il tutto facendo le opportune prove, ma non siamo ancora approdati ad una risposta.
I campioni vengono conservati a -20°C per entrambi i metodi estrattivi.
Chiaramente il metodo estrattivo B determina un qualcosa di diverso rispetto al metodo A, entrambi in commercio ed entrambi di ditte validissime,ma non riusciamo a capire cosa.
A qualcuno di voi č capitato qualcosa di simile?

GFPina
Moderatore

GFPina

Cittā: Milano


8398 Messaggi

Inserito il - 13 maggio 2013 : 18:31:59  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
scompare il DNA...
... e ricompare cin!

Ciao cin come stai? Che piacere ritrovarti sul forum!

Avete anche controllato l'acqua? Non č possibile che abbiate una contaminazione da DNasi?
Vi č successo con diversi kit della ditta B (diversi lotti) o ne č stato usato solo uno finora?

Non so se serva, ma magari avere i dettagli dei due metodi di estrazione (se non vuoi fare i nomi delle ditte) potrebbe aiutare.
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cin
Utente Junior

ptero

Prov.: Padova
Cittā: Padova


558 Messaggi

Inserito il - 29 maggio 2013 : 14:41:35  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di cin Invia a cin un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie Gfpina, ti ho mandato un messaggio.
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