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mollichina di pane
Utente Junior
121 Messaggi |
 Inserito il - 26 agosto 2014 : 11:44:53
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Ciao a tutti!
Dopo anni di silenzio eccomi tornata...
Ho un problema con la Real Time PCR. Aiuto!!!
Sto utilizzando il SyBr Green per la quantificazione relativa di alcuni geni su linee cellulari.
Il problema sono le curve di melting: nei pozzetti dei campioni ho prodotti specifici (es. Tm: 86°C con fluorescenza alta). Nei bianchi mi vengono dei picchi (es. Tm: 79°C con fluorescenza bassissima o quasi nulla) e alle volte anche doppi picchi.
Ho già fatto delle prove per escludere che si trattasse di una contaminazione: uso punte con filtri e lavoro sotto cappa, ho cambiato l'acqua, la mix e fatto nuove aliquote di oligo.
Cosa ne pensate?
 
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