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Messaggio inserito da maria rita

ciao a tutti!
spero che qualcuno di voi possa essermi utile...
nella pcr real-time tipo-specifica x HPV-18 su Taq-Man 7700 mi aspettavo un solo picco alla curva di Melting, invece ne ritrovo 2. non riesco a capire come discriminare il picco del mio frammento dal secondo picco...ma soprattutto mi piacerebbe sapere se quel secondo picco corrisponde a qualche altro frammento o a primer-dimer?
dubito che si tratti di dimeri poichè sul gel di agarosio non vedo 2 bande ma solo una! in realtà non so neanche a quale temperatura di melting aspettarmi il mio picco dell'HPV-18 e quindi non riconosco quale dei 2 picchi è il mio target! sapete dirmi come si calcola la Tm di un amplicone?? vorrei aggiungere che sul taq-man non uso le solite sonde, bensì il fluorocromo sybr-green.
aspetto risposte...graaaazie!
buona giornata!

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