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cir
Nuovo Arrivato

Prov.: Palermo
Città: palermo


3 Messaggi

Inserito il - 01 marzo 2008 : 19:23:48  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di cir Invia a cir un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti...sono nuova del gruppo
anche se e' gia' da tempo che seguo le discussioni del forum.
Ho 1 dubbio..forse banale
Faccio analisi molecolare su specie di Phytophthora
Ieri(venerdi) ho estratto il dna da suolo...e seguendo il protocollo ho lasciato il dna overnight, in isopropanolo...
Per motivi "tecnici" dovrò completare l'estrazione lunedì.
Questo incoveniente potrebbe creare qualche problema ai miei campioni?
il dna potrebbe avere problemi se passa troppo tempo in isopropanolo?? Io credo di no..ma ovviamente nn sono sicura. Volevo qualche chiarimento..da voi...praticamente è una richiesta di aiutoo...
Grazie mille
A presto


Cir

Dionysos
Moderatore

D

Città: Heidelberg


1913 Messaggi

Inserito il - 01 marzo 2008 : 21:59:44  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dionysos  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Dionysos Invia a Dionysos un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Sul manuale della Qiagen, se non sbaglio, c'è scritto
che l'isopropanolo può danneggiare il DNA, e per questo
va lavato via con etanolo.

Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)

Less Jim Morrison, more Sean Morrison!


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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi

Inserito il - 01 marzo 2008 : 22:48:00  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Beh la precipitazione in isopropanalo va bene overnight, per più tempo non è consigliata, rischi che si precipitino anche i sali e che si disidrati troppo il DNA rendendo difficile risospenderlo, inoltre questo potrebbe anche influire sulle reazioni seguenti che fai sul tuo DNA (x es. restrizione, sequenziamento...).

Quello che ti posso consigliare a questo punto è lavarlo molto bene con etanolo al 70%, dopo aver aggiunto l'etanolo 70% vortexa molto bene il tuo pellet e magari ripeti il lavaggio due volte in modo da eliminare il più possibile i sali.

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Cangrande
Utente Junior

Cangrande Della Scala

Prov.: Verona


280 Messaggi

Inserito il - 02 marzo 2008 : 13:32:29  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Cangrande Invia a Cangrande un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
GFPina come mai consigli di vortexare bene? è un mio dubbio personale

Magnifico atque victoriosissimo Domino, Domino Kani Grandi de la Scala.
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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi

Inserito il - 02 marzo 2008 : 19:29:16  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da Cangrande

GFPina come mai consigli di vortexare bene? è un mio dubbio personale


Per consentire all'etanolo di entrare bene nel campione e solubilizzare i sali che possono essere coprecipitati con il DNA.
Quando si fanno il lavaggi in etanolo è sempre bene vortexare prima di centrifugare!

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cir
Nuovo Arrivato

Prov.: Palermo
Città: palermo


3 Messaggi

Inserito il - 02 marzo 2008 : 20:41:20  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di cir Invia a cir un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie....
domani farò come consigliato..due lavaggi in etanolo 70% ed anzichè flick the tube briefley to whash the pellet darò un vortex leggero.
che preoccupazione...!
vi farò sapere come andrà con il seq.
A presto

Cir
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