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 PCR allele specifica.
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imy85x
Nuovo Arrivato

Angioletta
Cittā: napoli


110 Messaggi

Inserito il - 08 gennaio 2008 : 17:16:41  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di imy85x Invia a imy85x un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve a tutti...
Ho bisogno del vostro aiuto...
Non ho per niente capito il meccanismo della PCR allele specifica utilizzata per visualizzare una mutazione puntiforme in un gene..
Potete spiegarmi i passaggi molecolari di tale meccanismo?
Come e dove si utilizzano i 3 primers necessari a questo meccanismo?
Vi prego aiutatemi..ho l'esame tra 48 oreee


Imy
Le persone che meritano fiducia sono quelle che ti stanno accanto anche quando non le ami abbastanza.

Patrizio
Moderatore

mago

Cittā: Vancouver


1900 Messaggi

Inserito il - 08 gennaio 2008 : 20:12:25  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Patrizio  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Patrizio Invia a Patrizio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Usata per genotipizzare una variazione genetica e soprattutto rilevare e identificare SNPs,se in un certo locus e' presente una variazione puntiforme
si usano i Primer ASO (oligonucleotidi allele specifici),ne vengono disegnati 3 in tutto di cui 2 foreward e uno revers comune,i foreward presenteranno l ultimo nucleotide diverso che sara' uguale alla mutazione puntiforme....vengono poi assemblate 2 reazioni di PCR indipendenti con lo stesso DNA e identiche condizioni! molto stringenti,ma con i 2 primer diversi ora:

-Se il DNA e' omozigote,ibridera' solo con uno dei 2 primer forward...quindi si osserva solo la banda della PCR positiva e l altra ovviamente sara' negativa ( non c'e' appaiamento TARGET /PRIME )

-Se il DNA e' eterozigote entrambi le reazoini produrranno un amplificato anche se la banda sara' meno intenza


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imy85x
Nuovo Arrivato

Angioletta

Cittā: napoli


110 Messaggi

Inserito il - 08 gennaio 2008 : 20:35:33  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di imy85x Invia a imy85x un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazie patrizio

Imy
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