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Muster
Nuovo Arrivato
8 Messaggi |
 Inserito il - 04 novembre 2008 : 11:03:37
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Ciao ragazzi! E' il mio primo post su questo forum e volevo "inaugurarmi" con un bel quesito, che a dir la verità è un fac simile dell'esame di ing. genetica che dovrò sostenere veramente a breve (il 7  ) e purtroppo la prof solo stamattina ha messo 'sto malefico fac simile sul web.
Spero che, qualcuno saprà darmi delle delucidazioni.
Grazie mille mi state dando veramente un aiutone enorme.
Allegato:  226a.0025.file.doc
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ilarip
Utente Junior
Prov.: Bologna
Città: Bologna
432 Messaggi |
Inserito il - 04 novembre 2008 : 11:26:21
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ciaoooooo
prova a dirci come risponderesti tu (se nn a tutte le domande, almeno in parte) secondo me è più utile invece che aspettare che qualcuno lo faccia per te 
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Ho imparato.. .che le opportunità non vanno mai perse.
Quelle che lasci andare tu...le prende qualcun altro
Ho imparato...che è meglio dare consigli solo in due circostanze...
Quando sono richiesti e quando ne dipende la vita.
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Muster
Nuovo Arrivato
8 Messaggi |
Inserito il - 04 novembre 2008 : 11:56:55
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Ecco le mie (sicuramente erratissime risposte)
1) Per la prima domanda io creerei una libreria genomica e non di cDNA.
2) Il vettore che andrei ad utilizzare dovrà:
- Avere la possibilità di integrare l'inserto
- uno o più marcatori di selezione
- possedere un'ori indipendente
3) Per la costruzione della libreria genomica avrò bisogno di:
- enzimi di restrizione
- DNA polimerasi
- dNTP
- un vettore di clonaggio
- Primer
- cellule di E.coli
4) Nell'elettroforesi dovrei usare una soluzione di gel d'agarosio
5) Non sono capace a rispondere alla domanda sulla mappa.
6) per il sequenziamento della parte dell'inserto userò:
-DNA polimerasi
- dNTP
- ddNTP
- Primers
- vettore di clonaggio
- E.coli
7) userò un gel di poliacrilammide
8) la seq. sarà ATGGTCGCCATAGCGA
La seconda parte, ovvero, volendo esprimereil gene spinosina in e.coli.
1) userei un cDNA in quanto, derivando direttamente dall'mRNA, avrei direttamente il gene privo degli introni.
2) non sò rispondere all'ultima domanda.
Mi scuso dell'ENORME disturbo, e ringrazio quelle anime pie che avranno la pazienza di rispondermi.
Un salutone e un grosso GRAZIE.
Stefano |
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Muster
Nuovo Arrivato
8 Messaggi |
Inserito il - 04 novembre 2008 : 11:58:38
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effettivamente stavo rispondendo solo che ci ho messo un casino di tempo e mi hai "anticipato" 
Grazie comunque della disponibilità |
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Muster
Nuovo Arrivato
8 Messaggi |
Inserito il - 04 novembre 2008 : 13:11:36
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la mia ipotesi (sicuramente sbagliata) per la mappa è
|----|Hind3--|spaII--|----|--|spaII--|Hind3----|
(ogni | equivale a 1000 KDa)
Il discorso dei nt, essendo ogni coppia di basi uguale a 660 Da sarebbe:
0nt|----|1515nt|--|757nt--|----|--|3787nt--|757nt----|7575nt
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ilarip
Utente Junior
Prov.: Bologna
Città: Bologna
432 Messaggi |
Inserito il - 04 novembre 2008 : 13:18:45
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tranquillo nn c'è problema
mi spiace però io nn ti so aiutare un granche perchè nn ho fatto un esame di ingegnieria genetica
vedrai che altri ti sapranno aiutare
ciaooooooooo |
Ho imparato.. .che le opportunità non vanno mai perse.
Quelle che lasci andare tu...le prende qualcun altro
Ho imparato...che è meglio dare consigli solo in due circostanze...
Quando sono richiesti e quando ne dipende la vita.
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Muster
Nuovo Arrivato
8 Messaggi |
Inserito il - 04 novembre 2008 : 15:40:15
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| Nobody? |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 04 novembre 2008 : 23:20:09
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Beh dai un po' di pazienza! Spesso non si hanno delle risposte subito!
Comunque tornando agli esercizi:
Citazione:
3) Per la costruzione della libreria genomica avrò bisogno di:
- enzimi di restrizione
- DNA polimerasi
- dNTP
- un vettore di clonaggio
- Primer
- cellule di E.coli
A cosa ti dovrebbero servire le cose segnate in rosso?
E poi manca qualcosa, come li attacchi i frammenti al vettore?
Prova a rispondere di nuovo!
Citazione:
6) per il sequenziamento della parte dell'inserto userò:
-DNA polimerasi
- dNTP
- ddNTP
- Primers
- vettore di clonaggio
- E.coli
Ancora, a cosa ti dovrebbero servire le cose segnate in rosso? E anche qui manca qualcosa: cosa sequenzi???
Citazione:
La seconda parte, ovvero, volendo esprimere il gene spinosina in e.coli.
1) userei un cDNA in quanto, derivando direttamente dall'mRNA, avrei direttamente il gene privo degli introni.
2) non sò rispondere all'ultima domanda.
Beh basta pensarci un po'! Facendola esprimere in E. Coli che promotore dovrei usare?
Citazione:
Messaggio inserito da Muster
la mia ipotesi (sicuramente sbagliata) per la mappa è
|----|Hind3--|spaII--|----|--|spaII--|Hind3----|
(ogni | equivale a 1000 KDa)
Scusa ma questa non l'ho capita! Magari è anche giusta, anche se non mi sembra, ma scritta così non la capisco!
Comunque la mappa sarebbe:
E H S E
|---------|-------------------------|-------------|
1000 2500 1500
E = EcoRI
H = HindIII
S = SpaII
E poi cosa c'entrano i KDa? Si tratta di frammenti di DNA si misurano in bp o kb.
Lo standard che vedi nel gel è:
- 7000bp
- 5000bp
- 4000bp
- 3000bp
- 2000bp
- 1000bp
Citazione:
Messaggio inserito da Muster
Il discorso dei nt, essendo ogni coppia di basi uguale a 660 Da sarebbe:
0nt|----|1515nt|--|757nt--|----|--|3787nt--|757nt----|7575nt
Questo a cosa si riferisce???
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Muster
Nuovo Arrivato
8 Messaggi |
Inserito il - 05 novembre 2008 : 10:50:50
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3) Giustamente il clonaggio sarebbe effettuato dai vettori stessi e dalle cellule di E.coli e quindi non devo utilizzare dNTP e DNA polimerasi...
Manca la ligasi giusto?
4) Giusto! E.coli è indicato come reagente e non serve, il vettore idem.
manca il DNA inserto... (l'avevo dato per scontato  )
Per il promotore utilizzerei LAC giusto?
La mappa ho veramente inventato alla grande
Ti ringrazio infinitamente per la tua ENORME cortesia nel perdere tempo con me
Per il resto, dal momento che non hai fatto alcuna correzione, credo abbia fatto bene giusto?
Ancora un grazie e un abbraccio.
Stefano |
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