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Discussione |
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Ricciola
Nuovo Arrivato
38 Messaggi |
 Inserito il - 09 febbraio 2009 : 15:51:01
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Ciao,
prima il western mi veniva sempre, ora ho un problema con la corsa elettroforetica.
Il "sintomo" è che durante la corsa il marker mi scompare sotto gli occhi mentro corro (non sono udinì).
Quando blotto il marker mi si trasferisce a "strisciate" anziché trattini ben definiti e lo sviluppo...bé, è un disastro.
aldilà del rosso ponceau mi sapete dare qualche dritta risolutiva?
Pensavo di aver risolto facendo una madre per il tampone di corsa nuovo, invece....
 
Ricciola
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Biotecgen
Utente Junior
Città: Napoli
191 Messaggi |
Inserito il - 09 febbraio 2009 : 16:58:09
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| prova a cambiare il generarote |
non esistono domande indiscrete...le risposte a volte lo sono. |
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Ricciola
Nuovo Arrivato
38 Messaggi |
Inserito il - 09 febbraio 2009 : 17:38:11
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domani ci provo....tanto le sto provando tutte!
poi ti faccio sapere |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 09 febbraio 2009 : 17:40:33
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| Controlla anche il pH di tutte le soluzioni, non solo il tampone di corsa, ma anche quelli del gel! |
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Ricciola
Nuovo Arrivato
38 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2009 : 09:16:06
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grazie GFPina, ho già controllato tutti i pH e sono tutti ok, come pure il marker (ho iniziato quello nuovo).
Oggi farò una prova con gel a % diversa e con alimentatori diversi...vi tengo aggiornati! |
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Ricciola
Nuovo Arrivato
38 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2009 : 12:53:13
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nada, non è né l'alimentatore né l'apparecchio elettroforetico.
A questo punto non mi rimane che buttare via tutto e rifare/cambiare tutto...mi sono pure fatta prestare dell'acqua distillata dall'esterno....
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là
Utente Junior
565 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2009 : 13:02:15
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| magari è il marcatore che si è "guastato". una volta una ragazza qui da me per sbaglio lo ha fatto bollire insieme ai campioni, e poi non correva più,o se correva lo faceva malissimo, un po' come è successo a te. |
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Biotecgen
Utente Junior
Città: Napoli
191 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2009 : 13:31:00
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si sicuramente nel marcatore c'è qualcosa che non va, ma come si spiegherebbe poi che lo sviluppo è un disastro ??
ho capito che non ti piace fare il rosso ponceau ma secondo me ti sarebbe utile xchè se non vedi le bande col ponceau io sarei orientato a pensare che il problema non sta nemmeno nel marcatore ma nei reagenti che usi per fare il gel. |
non esistono domande indiscrete...le risposte a volte lo sono. |
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Ricciola
Nuovo Arrivato
38 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2009 : 16:09:58
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ciao,
non penso che il problema sia il marker, anche perché l'ho cambiato e uso il mio e quello di altro team insieme e non cambia niente...
il marker è l'indicatore che la corsa non va....
boooooooooooooooo
grazie a tutti per le risposte comunque! |
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mattia.dinunzio
Nuovo Arrivato
116 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2009 : 16:29:58
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ti direi di mandare una mail a Dr House...
in ogni caso piu faccio sto lavoro e piu mi accorgo che ce ne sono di cose inspiegabili... |
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Biotecgen
Utente Junior
Città: Napoli
191 Messaggi |
Inserito il - 10 febbraio 2009 : 18:42:26
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a me per due settimane nel mese di Gennaio nel fare i Western me ne sono capitate di tutti i colori, mi sono fatto una cultura impressionante, posso dire che sono quasi esperto di Western 
Ad ogni modo sono inconvenienti che ti fanno fare esperienza e crescere, basta farne tesoro
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non esistono domande indiscrete...le risposte a volte lo sono. |
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Ricciola
Nuovo Arrivato
38 Messaggi |
Inserito il - 11 febbraio 2009 : 13:06:52
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Biotecgen: "modestie" a parte, sono sicura di essere l'unica che si può "vantare" del marker che sparisce...probabilmente sono un X-girl e più che a Dr House devo scrivere a Fox Mulder  |
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nyo84
Utente Junior
Prov.: Brescia
Città: Piancogno
239 Messaggi |
Inserito il - 12 febbraio 2009 : 16:54:16
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| i gel li fai tu?i reattivi sono magari scaduti?o sono stati per sbaglio conservati male? |
Fai attenzione quando leggi libri di medicina..potresti morire per un
errore di stampa... |
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Ricciola
Nuovo Arrivato
38 Messaggi |
Inserito il - 13 febbraio 2009 : 15:46:10
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sì sì faccio tutto io; il temed l'ho cambiato, perché era finito, e non cambia nulla, la prossima prova cambierò anche l'APS, a forza di prove è finito pure quello
cmq la polimerizzazione mi sembra ok, ma ormai non mi resto molto altro da cambiare... |
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Aureus
Utente Junior
Prov.: Forlì-Cesena
Città: Gambettola
123 Messaggi |
Inserito il - 13 febbraio 2009 : 16:14:38
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Secondo me il problema è nella composizione del Gel di Poliacrilammide..
...stai attenta alle composizioni del temed e APS
...lascialo polimerizzare alla luce
Io di solito uso un 8% e ne faccio 10 ml:
-H2O 4.6 ml
- 30% acrilammide 2.7 ml
-1.5 M Tris ph 8.8 2.5 ml
-10% SDS 0.1 ml
-10% AMMONIO PERSOLFATO (APS) 0.1 ml
-TEMED 0.006 ml
Buonafortuna!
p.s.
Puoi pubblicare una foto della tua "strisciata" di Gel dopo colorazione?
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www.tlbspazio.it
Tecnici di Laboratorio Biomedico
Lorenzo Nardi |
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Ricciola
Nuovo Arrivato
38 Messaggi |
Inserito il - 13 febbraio 2009 : 17:39:26
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Ciao Aureus,
grazie per il tuo messaggio; qualunque sia il problema, è davvero strano che prima andava bene ed ora non più...
per la rabbia ho già buttato via tutti i blot con la "strisciata di marker" che mi veniva dopo il trasferimento, se mi risuccede pubblico la foto, ma spero che non risucceda ehehe  |
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dabar
Nuovo Arrivato
Prov.: Catania
Città: Catania
30 Messaggi |
Inserito il - 13 febbraio 2009 : 19:08:44
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Ciao Ricciola,
ma tu usi acrilammide e N,N'-metilen-bis-acrilammide come polveri separate e poi le misceli? E se è così in che rapporto stanno le due?...potrebbe trattarsi che qualcuna delle due polveri è scaduta.
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dabar
Nuovo Arrivato
Prov.: Catania
Città: Catania
30 Messaggi |
Inserito il - 13 febbraio 2009 : 19:10:18
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| ...PS:..dimenticavo. Dopo aver fatto sciogliere in H2O pH la soluzione...e se si a che pH deve essere secondo il tuo protocollo? |
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Ricciola
Nuovo Arrivato
38 Messaggi |
Inserito il - 20 febbraio 2009 : 14:37:13
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HO RISOLTOOOOOOOOOOOO!!!!!!!!!!!!!!!!!! 
ragazzi, era una cosa a cui nessuno di noi, io per prima, ha pensato, ed ora che so cos'era mi sembra ridicolo non averci pensato prima:
SDS!!!!!!!!!!!!!! |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 20 febbraio 2009 : 15:42:07
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| Scusa ma per curiosità, esattamente cosa era successo all'SDS? |
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Ricciola
Nuovo Arrivato
38 Messaggi |
Inserito il - 23 febbraio 2009 : 10:32:24
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francamente, non lo so, ho 2 ipotesi:
A) è stato inquinato
B) è precipitato perché la madre del running la tengo in frigo ed ho iniziato ad avere problemi in contemporanea con l'abbassamento delle temperature (il riscaldamento è quello che è...)
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Western...che disperazione! 
Didattica e Relazioni
