Batteri Competenti (per elettroporazione)
Descrizione
Classico protocollo per ottenere cellule competenti da trasformare via elettroporazione.
Crescere un inoculo di cellule ON in 10 ml di LB, a 37°C (o a 30°C a seconda del ceppo )Diluire il precedente inoculo in 1 litro di LB Crescere a 37°C ( o 30°C ) fino a OD600 =0.6Incubare le cellule in ghiaccio per 15-30 min.Centrifugare a 5000 rpm per 15 min a 4°CRisospendere il pellet di batteri in 1 litro di dH2O precedentemente raffreddataCentrifugare a 5000 rpm per 15 min.Risospendere il pellet in 500 ml di dH2O precedentemente raffreddataCentrifugare a 5000 rpm a 4°C.Risospendere in 20 ml di 10% GliceroloCentrifugare a 5000 rpm a 4°CRisospendere in 2 ml di 10% GliceroloFare aliquote da 100 µl, congelare rapidamente in azoto liquido o ghiaccio secco.Conservare a -80°CConsiglio
Utilizzare materiale sterile.
