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nannuto
Nuovo Arrivato
33 Messaggi |
 Inserito il - 17 novembre 2010 : 14:22:16
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Coltivo cellule primarie su vetrino, faccio degli esperimenti e le fisso con PF 4% e fin qui tutto bene, le cellule appaiono bellissime. Quando prendo i suddetti vetrini per farci qualsiasi esperimento (es TUNEL o immunofluorescenza), già nei primissimi passaggi si staccano praticamente tutte. Ho provato ad usare PBS piuttosto che TBS per i lavaggi ma il risultato è lo stesso. A parte il pretrattamento dei vetrini con polilisina avete qualche suggerimento o vi sono capitate situazioni simili?? thanks!
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elly_
Utente Junior
400 Messaggi |
 Inserito il - 21 novembre 2010 : 21:06:40
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dopo che hai fissato i vetrini in modo corretto le cellule non dovrebbero staccarsi (non è un problema della polilisina). l'unica cosa che mi vieni in mente è che potresti "maltrattare" un po' i campioni, tipo buttandogli direttamente sopra le tue soluzioni nei passaggi sucessivi... provare a essere un po' più gentili?
hai provato a farci il dapi? |
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nannuto
Nuovo Arrivato
33 Messaggi |
Inserito il - 22 novembre 2010 : 14:01:38
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| metto i reagenti molto delicatamente e la cosa strana è proprio che il distacco sia post fissazione. Ho provato sì a fare il dapi ma distaccandosi tutte le cellule nn trovo più nulla sul vetrino! |
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arianna86
Nuovo Arrivato
1 Messaggi |
Inserito il - 22 novembre 2010 : 20:44:00
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| ciao! anche io ogni tanto ho problemi con le cellule sul vetrino anche se non con colture primarie ma con una linea cellulare un po' delicata! non so se può servire ma io invece di "buttargli"il PBS sopra sposto il vetrino da un pozzetto ad un altro in cui ho già messo il PBS. Con le mie cellule ho visto che funziona abbastanza e non si staccano ma magari con le colture primarie non funziona! bo! |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 23 novembre 2010 : 10:30:49
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prova a pretrattare i vetrini per una notte con etanolo 100% (praticamente mettili in un falcon pieno di etanolo e lascia a ruota ON). Il giorno dopo li distribuisci su un pezzo pulito di carta stagnola, lasci evaporare l'etanolo e poi li sterilizzi in autoclave o in stufa. questo trattamento serve a sgrassare i vetrini prima di farci il coating. Prova.  |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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nannuto
Nuovo Arrivato
33 Messaggi |
Inserito il - 24 novembre 2010 : 16:22:19
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| ah ok..proverò! questa dell'etanolo non la conoscevo anche se credo che il problema sia proprio il supporto, ossia il vetro! su polistirene infatti è un'altra cosa... |
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SymphonyOfStorm
Nuovo Arrivato
Città: Helsinki
1 Messaggi |
Inserito il - 08 giugno 2011 : 10:33:36
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Salve a tutti
Ho anche io lo stesso problema, le cellule si staccano dopo la fissazione 
In più io non posso nemmeno pretrattare il vetrino con qualche forma di coating, quindi ho le cellule (CHO se può servire) che crescono direttamente sul vetro... avete qualche suggerimento?
La mia supervisor ha detto che lei metteva i vetrini in EtOH qualche minuto, non so quanto di preciso ma di sicuro non overnight, poi li lavava con MilliQ prima di piastrare le cellule ma senza sterilizzarli. Ora ho provato a lasciarli una notte in etanolo e vediamo se va meglio, ma non sono molto ottimista (non avevo ancora letto questa discussione e non ho pensato a sterilizzarli, se mi si staccano ancora, la prossima volta proverò).
PS il vetrino è più piccolo del pozzetto, quindi quando pipetto sto sempre attenta a togliere e mettere i reagenti nello "spazio extra", non penso sia questione di "maltrattamento" :)
Grazie millemila! |
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distacco cellule dopo fissazione
Didattica e Relazioni
