Salve ragazzi, volevo avere delucidazioni riguardo la quantificazione assoluta e relativa della real time pcr. Ho già guardato nel forum ma non c'è stato niente che m'ha potuto aiutare. Non riesco a capire proprio i passaggi in entrambre. Ho capito che si parte dalla Pcr ma per quanti campioni?? grazie ho l'esame a breve se mi aiutate siete davvero gentili.
la pcr ti da solo un amplificato del tuo trascritto, mentre invece la real time ti dà in contemporanea l'amplificato e la quantità di questo in relazione ad una curva standard di taratura. Puoi quindi fare confronti fra vari amplificati per vedere se i tuoi esperimenti sono riusciti. Nella mia tesi triennale ho utilizzato la RT-PCR per fare un confronto tra i DNA di lievito con varie mutazioni per geni della crescita del subtelomero: ceppi con due geni mutati avevano una quantità minore di amplificato rispetto al wild-type o a ceppi con una sola mutazione. Spero di esserti stata d'aiuto.