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prandoFDA
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17 Messaggi
Inserito il - 20 gennaio 2007 : 17:04:29  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di prandoFDA Invia a prandoFDA un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao a tutti, qualcuno di voi si č mai trovato a dover digerire dei pezzi (linfonodi/milza/polmone/tonsilla/derma/ecc) per ricavarne cellule primarie (endoteliali/fibroblasti/ecc)?

se avete familiaritā con queste procedure, e le avete in qualche modo ottimizzate mi potreste essere d'aiuto perchč il semplice sminuzzamento + digestione con collagenasi/dispasi ha un'efficienza molto bassa

grazie!
life happens

chick80
Moderatore

DNA

Cittā: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 20 gennaio 2007 : 21:34:45  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Io faccio colture primarie neuronali, e faccio una digestione con papaina.
Dei miei amici usano un protocollo simile per la surrenale.

Loro usano collagenasi per 30' e poi papaina per 30-45' a 37°C. Dopo di questo blocchi la digestione con siero, centrifughi, risospendi il pellet in un piccolo volume e sminuzzi con una Pasteaur o con una punta da P1000.
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prandoFDA
Nuovo Arrivato


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17 Messaggi
Inserito il - 22 gennaio 2007 : 16:49:16  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di prandoFDA Invia a prandoFDA un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
papaina? ma dai...che figata..e quanto costa? con la tripsina invece hai mai fatto pre-digestioni?

il mio problema č che dopo la digestione restano cmq pezzi enormi di pseudo-parenchima che non riesco a filtrare (nonostante l'ultima volta abbia triplicato il tempo di incubazione)
life happens
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chick80
Moderatore

DNA

Cittā: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 22 gennaio 2007 : 22:38:15  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ho usato la tripsina, ma danneggia troppo il tessuto.

La papaina costa poco, tipo un 15-20 euro per 25g. (conta che ne uso ~10mg per 5ml di buffer di dissociazione, quindi dura un bel po')
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prandoFDA
Nuovo Arrivato


Prov.: Brescia
Cittā: Botticino


17 Messaggi
Inserito il - 23 gennaio 2007 : 12:18:33  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di prandoFDA Invia a prandoFDA un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
uhmm...sapresti anche dirmi la ditta da cui ti servi? magari gli chiedo un'aliquota omaggio...
life happens
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chick80
Moderatore

DNA

Cittā: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 23 gennaio 2007 : 21:04:00  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
La compro da Sigma (#P3375-25G) , ma credo che sia abbastanza comune da trovare, probabilmente anche Invitrogen la produce, ma non son sicuro.
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