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Autore

Discussione

Alessia
Nuovo Arrivato

Prov.: Roma
Citt�: Roma

59 Messaggi

Inserito il - 11 dicembre 2011 : 00:36:05

ragazzi scusate ma nn mi � chiara una cosa..nella trasfezione il DNA deve essere supercoiled o lineare???

grazie ciao

aivlis89
Nuovo Arrivato

6 Messaggi

Inserito il - 13 dicembre 2011 : 21:31:45

Ciao! Mi permetto di risponderti perch� in questo periodo sto studiando il clonaggio per la messa a punto di una proteina di fusione e ho fatto qualche trasfezione. Quindi, dal quel che mi risulta, nella trasfezione (quando dobbiamo favorire l'ingresso del costrutto genico all'interno delle cellule eucariotiche per favorire l'espressione del gene di interesse), il DNA cio� il prodotto della ligation tra il vettore e l'inserto vale a dire questa nuova molecola di DNA ricombinante � supercoiled, in quanto l'inserto � ormai inserito all'interno del vettore grazie alla digestione con gli stessi enzimi di restrizione ( + defosforilazione per il vettore) e poi ligazione per rispristinare il legame fosfodiestereo tra le sticky ends.