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AntonioSillo
Nuovo Arrivato

61 Messaggi

Inserito il - 20 novembre 2012 : 22:23:21

Salve,
vorrei sapere come approcciarmi per effettuare uno studio di proteomica quantitativa usando la tecnica SILAC. Qualcuno ha mai lavorato con questa tecnica e mi saprebbe dire il protocollo che ha utilizzato? grazie

Patrizio
Moderatore

Citt�: Barcellona

1914 Messaggi

Inserito il - 21 novembre 2012 : 08:00:05

I protocolli sono diversi, dipende da che tipo di esperimento vuoi fare, ti allegato dei file che ti potranno essere utili.
Questo � una parte di protocollo http://www.piercenet.com/files/tr0060-silac-tryptic-digest.pdf

questo � un'altro

http://www.rubicon-net.org/data/file/735_EN_insolutiondigestformassspectrometrymsanalysis.pdf

Allegato:

mol lab.pdf
696,02�KB

Allegato:

mol lab2.pdf
668,5�KB

AntonioSillo
Nuovo Arrivato

61 Messaggi

Inserito il - 21 novembre 2012 : 11:58:16

Scritto da MolecularLab Mobile

Ti ringrazio! L'intenzione � quella di applicare uno studio di proteomica quantitativa per valutare l'espressione di certe proteine che poi mi isoler� con la 2-D oppure con un approccio shotgun.. In ogni caso mi interessava sapere come muovermi per il reagentario ecc..

AntonioSillo
Nuovo Arrivato

61 Messaggi

Inserito il - 24 novembre 2012 : 21:01:42

Patrizio,
vorrei farti una domanda. nel caso in cui arriva il momento di effettuare un cambio terreno, come mi regolo?
in altre parole: preparo a parte un terreno marcato e uno non e poi aggiungo le stesse quantit� di terreno marcato nella coltura marcata e di terreno non marcato nella coltura non marcata?

Patrizio
Moderatore

Citt�: Barcellona

1914 Messaggi

Inserito il - 25 novembre 2012 : 03:04:17

Visto che tu sei un chimico, credo che faresti bene a chiedere ad un biologo che sappia lavorare con le cellule.
Il cambio di terreno non � un caso...� una necessit� e le cellule crescono normalmente come una normale coltura cellulare fatta eccezione per il terreno.
Se lavori con cellule di mammifero, insetto etc.. devi usare un terreno apposta per SILAC che sia privo di quegli aminoacidi isotopi e che andrai ad aggiungerci, come ad esempio Arg6 Lys4( ci sono anche terreni gi� pronti ) quindi avrai cellule marcate heavy e in un'alta piastra cellule marcate light( senza isotopi )
se lavori con lieviti ci sono altre differenze.
Le cellule cresceranno in queste condizioni fino a che non saranno marcate al 100%, in genere per certe ragioni non si arriva mai al 100%, tuttavia dopo 6-7 divisioni dovrebbero essere ok.

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