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juandste
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2 Messaggi
Inserito il - 23 novembre 2013 : 20:14:54  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di juandste Invia a juandste un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve a tutti vorrei porvi un quesito.
Per dosare le proteine con metodo di Bradford innanzitutto costruisco una retta di taratura con BSA (la devo fare ogni qual volta devo dosare le proteine o posso utilizzare una che ho già costruito?)
Come procedo
concentrazione nota BSA 1ug/ul
faccio tipo 7 punti con LA BSA
1ug
3ug
5ug
7ug
9ug
11ug
13ug
nei rispettivi volumi di acqua 199; 197; 195 ecc..
poi aggiungo blue di comassie 4x lo porto ad 1x e ne prelevo 800ul.
registro le assorbanze di ognuno ovviamente facendo per prima un bianco con 200ul acqua e 800ul blue comassie.
calcolo la retta di regressione con Excel e supponiamo che mi dia questa equazione y = 0,0439x + 0,0798 R² = 0,9935

Ora procedo con le mie proteine con concentrazione incognita. Dallo stock prelevo 10ul per fare 5 punti:
1ul
1.5ul
2ul
2.5ul
3ul
aggiungo nei rispettivi volumi di acqua 199; 198.5; 198 ecc.. poi come per la BSA aggiungo 800ul di comassie 1x (da 4x lo porto 1x)
faccio il bianco e registro le assorbanze e supponiamo che con la stessa logica mi ritrovi questa equazione y= 0.0736x + 0.0426 R= 0.98007.
A me hanno insegnato che per calcolare la concentrazione ug/ul delle proteine (incognite) devo rapportare questi due valori:
0.0736 / 0.0439 = 1.67 ug/ul
Qualcuno si ritrova con questi passaggi?
Faccio qualche errore? C'è qualche altro modo più semplice per ritrovare la concentrazione? (intendo sempre con Bradford e retta di taratura BSA).

vi ringrazio e vi saluto,
in attese di vostre risposte

vincenzobio
Nuovo Arrivato



2 Messaggi
Inserito il - 25 novembre 2013 : 16:52:13  Mostra Profilo Invia a vincenzobio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao
0.0736 / 0.0439 = 1.67 ug/ul questi valori da dove provengono?
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juandste
Nuovo Arrivato




2 Messaggi
Inserito il - 26 novembre 2013 : 07:04:04  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di juandste Invia a juandste un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Quando con excel o con kaleidagraph, o qualsiasi altro programma in grado, calcolo la retta di regressione mi dà le equazioni riportate sopra. Retta regressione BSA
y = 0,0439x + 0,0798 R² = 0,9935
lo stesso faccio per le proteine da dosare
y= 0.0736x + 0.0426 R= 0.98007.

Ecco i valori (che come dicevo già sono nella discussione sopra)
A me hanno insegnato che per calcolare la concentrazione ug/ul delle proteine (incognite) devo rapportare questi due valori:
0.0736 / 0.0439 = 1.67 ug/ul
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