| Autore |
Discussione |
|
|
JULIO
Nuovo Arrivato
83 Messaggi |
 Inserito il - 03 novembre 2008 : 15:56:56
|
Ciao ragazzi,volevo avere delle info sulla diluizione della staursporina in dmso...se ho 1mg di staurosporina in quanto DMSO devo diluirla???
Grazie
|
|
|
|
|
chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 03 novembre 2008 : 16:54:49
|
Dipende da che concentrazione vuoi!
Comunque dal datasheet della Sigma:
This product is soluble in DMSO, DMF; slightly soluble in methanol, ethyl acetate and chloroform; insoluble in water. Sigma has dissolved this product in methanol at 2 mg/mL and observed a clear, colorless to yellow solution. Limited testing has also shown this product to be soluble in acetonitrile to at least 1 mg/mL and in DMSO to at least 5 mg/mL.
|
Sei un nuovo arrivato?
Leggi il regolamento del forum e presentati qui
My photo portfolio (now on G+!) |
 |
|
|
JULIO
Nuovo Arrivato
83 Messaggi |
Inserito il - 03 novembre 2008 : 16:58:55
|
Non so scegli tu, vorrei avere un esempio...1mM,10mM,100mM!!
Grazie mille |
|
|
|
chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 03 novembre 2008 : 18:01:25
|
Allora, in generale devi considerare un paio di cose.
Supponiamo tu voglia usare la sostanza per trattare delle cellule: siccome usi DMSO come veicolo conviene fare una soluzione almeno 1000/10000 volte più concentrata della concentrazione che vuoi usare. Questo perchè il DMSO è tossico per le cellule, quindi meno ne metti meglio è.
Se ad es. vuoi trattare le cellule con 1nM staurosporina allora farai uno stock ad es. 10mM, poi metterai 1ul di questa soluzione per 10ml di medium per fare il trattamento.
Il peso molecolare della staurosporina è 466.5 g/mol; tu ne hai 1 mg, quindi ne hai 0.0021 mmol=21nmol (dividi per il PM).
Volendo fare una soluzione 10mM devi mettere 10mmol per litro, cioè 10nmol per ml. Tu hai 21nmol quindi le metterai in 2.1ml di DMSO.
 |
Sei un nuovo arrivato?
Leggi il regolamento del forum e presentati qui
My photo portfolio (now on G+!) |
|
|
|
JULIO
Nuovo Arrivato
83 Messaggi |
Inserito il - 04 novembre 2008 : 10:09:27
|
ok,quindi se ho 1mg di sts e voglio una concentrazione di 1mM quanto DMSO devo aggiungere?
Grazie |
|
|
|
chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 04 novembre 2008 : 11:49:15
|
Beh, è molto semplice utilizzando il sistema che ti ho scritto sopra...
Comunque se per fare 10mM devi mettere 2.1ml di DMSO, per fare 1mM devi metterne 10 volte tanto, cioè 21ml. Quindi ti conviene, a mio avviso, farla 10mM. |
Sei un nuovo arrivato?
Leggi il regolamento del forum e presentati qui
My photo portfolio (now on G+!) |
|
|
|
JULIO
Nuovo Arrivato
83 Messaggi |
Inserito il - 04 novembre 2008 : 12:02:50
|
Grazie mille,si avevo fatto già il calcolo ma volevo avee la tua confrma visto che 21ml DMSO mi sembrano troppo...
Poi ti volevo chiedere se ho 500microltri di terreno,la madre sts 1mM e voglio una concentrazione di 500nM di sts quanti microlitri di sts devo aggiungere al mio terreno?
Scusa per le domande ma sono al'inizio del dottorato,sono da solo e avrei bisogno di qualcuno che mi da' una mano con i calcoli..
Grazie ancora |
|
|
|
JULIO
Nuovo Arrivato
83 Messaggi |
Inserito il - 12 novembre 2008 : 15:56:20
|
| ragazzi mi date una mano con i calcoli... |
|
|
|
Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 13 novembre 2008 : 17:58:34
|
JULIO, il forum è pieno di topic che parlano di calcoli, diluizioni, concentrazione etc, quindi secondo me ti conviene fare una bella ricerca e leggere le discussioni, perchè se impari il metodo stai sicuro che poi non lo dimentichi più, mentre se ora ti dicessimo quanti ul di sostanza x devi aggiungere per la tua Cf la prossima volta non sarai in grado di farlo da solo e per un dottorando è importante almeno essere sciolti con i calcoli.
ti invito a fare una revisione dell'argomento quì sul forum, in ogni caso ti ricordo una delle "regole auree"  del laboratorio:
Vf x Cf= Vi x Ci
da questa formula sei in grado da solo di calcolare quanti microlitri di staurosporina 1mM devi aggiungere a 500 ul di terreno per averla a concentrazione 500 nM?
|
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
|
|
|
|
JULIO
Nuovo Arrivato
83 Messaggi |
Inserito il - 14 novembre 2008 : 13:13:49
|
Si i calcoli che ho fatto mi portano ad pescare 0,25 microlitri,ma io nn ho una pipetta che mi permetta di pescare questo volume come posso fare?
grazie |
|
|
|
chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 14 novembre 2008 : 13:17:42
|
Fanne 4 volte tanto o falla 4 volte piùmeno (edit: piccolo errore di stampa!) concentrata così te ne serve 1 microlitro.
Oppure cerca qualcuno che ti presti una P2. |
Sei un nuovo arrivato?
Leggi il regolamento del forum e presentati qui
My photo portfolio (now on G+!) |
|
|
|
JULIO
Nuovo Arrivato
83 Messaggi |
Inserito il - 14 novembre 2008 : 13:54:33
|
Scusa potresti spiegarmi come fare...
ciao |
|
|
|
chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 14 novembre 2008 : 14:56:46
|
Dai, è davvero molto molto semplice, prova a ragionarci un po' su. Questa è una delle cose più importanti da saper fare se vuoi lavorare in un laboratorio, qualsiasi tipo di esperimenti tu voglia fare avrai bisogno di saper fare le diluizioni.
Tu hai uno stock di sostanza a concentrazione X, non ci interessa per questo ragionamento.
Ti fai i tuoi calcoli e ti viene fuori che devi aggiungere 0.25microlitri a ciascuna piastra di cellule per avere la concentrazione corretta.
Non puoi mettere 0.25 ul perchè non hai una pipetta abbastanza sensibile, benissimo, allora fai in modo di doverne mettere di più, ad es. 1 ul, che è 4 volte tanto.
Se però metti 1 ul metterai 4 volte tanta sostanza, e quindi non va bene. Soluzione: parti da uno stock 4 volte meno concentrato, e quindi in 1 ul avrai la stessa quantità di sostanza che avevi in 0.25 ul dello stock più concentrato.
Come faccio a fare uno stock 4 volte meno concentrato? Semplice, diluisci 4 volte il tuo stock attuale. Questo si può anche dire fare una diluizione 1:4.
Quindi per diluire 4 volte devi mettere 1 volume di stock in 4 volumi finali, il che significa 1 volume di stock + 3 volumi di solvente.
Quindi 1 ml di stock + 3 ml di solvente. Oppure 100 ul di stock + 300 ul di solvente. Oppure 250 di stock + 750 di solvente. Oppure 342.35 di stock + 1027.05 di solvente... e puoi andare avanti all'infinito.
Spero sia chiaro, perchè non so proprio in che altro modo spiegartelo... |
Sei un nuovo arrivato?
Leggi il regolamento del forum e presentati qui
My photo portfolio (now on G+!) |
|
|
|
JULIO
Nuovo Arrivato
83 Messaggi |
Inserito il - 14 novembre 2008 : 19:38:00
|
Grazie ma so fare le diluizioni ma è il metodo per calcolare che ti chiedo perchè mi è stato spiegato in diversi modi.
Per esempio in questo caso mi hanno insegnato ad utilizzare la diluizione intermedia 1:100(in altri casi 1:10 o 1:50)....
Ti ho chiesto come fare per poter capire meglio quale metodo sia più corretto utilizzare.
Comunque ti ringrazio molto
|
|
|
|
chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 14 novembre 2008 : 22:47:27
|
Ok, se questo è il problema allora la risposta è semplicissima. Usa il metodo che ti piace di più! Se alla fine il risultato è lo stesso, vedi tu quello che ti viene più comodo.
Riprendendo l'esempio di sopra, io ti ho detto che se diluisci 1:4 allora puoi usare 1 ul invece di 0.25ul.
Ma nessuno ti vieta di diluire 1:8 e usarne 2ul. L'importante è che alla fine sulle tue cellule ci finisca la quantità giusta di sostanza.
Giusto per precisione, questo ragionamento vale ovviamente fino a quando il volume del tuo trattamento è negligibile in rapporto al volume del medium (pochi microlitri in 10-20 ml di medium sono decisamente trascurabili). |
Sei un nuovo arrivato?
Leggi il regolamento del forum e presentati qui
My photo portfolio (now on G+!) |
|
|
|
sabrina lombino
Nuovo Arrivato
2 Messaggi |
Inserito il - 01 marzo 2014 : 15:55:43
|
| salve vorrei sapere che tipo di protocollo devo seguire per indurre apoptosi mediante staurosporina, in particolare devo indurla a spermatozoi, è un controllo positivo che mi serve per valutare poi al citofluorimetro la percentuale di apoptosi in spermatozoi mediante l'annessinaV. Spero di essermi spiegata. |
|
|
| |
Discussione |
|
Diluizione staurosporina
Didattica e Relazioni
