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Luis 22
Utente
Città: Bari
755 Messaggi |
 Inserito il - 19 maggio 2015 : 00:48:43
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Ciao a tutti!
Ho bisogno di un chiarimento circa la correlazione tra la crescita batterica e la sua misurazione tramite assorbanza.
Su un kit maxiprep della Sigma (Maxiprep GeneElute HD Sigma) viene riportato che in caso di un numero molto basso di cellule
per aumentare la resa di plasmidi low copy è possibile utilizzare un volume di coltura più adatto, basato sulla massa cellulare definendone un valore ottimale di 750.
Riporta poi la formula per il calcolo del volume ottimale, pari a:
Volume ottimale = 750 / Assorbanza a 600 nm (dopo crescita ON)
Ora, quello che non mi è chiaro, è perchè più è bassa l'assorbanza, più è alto il volume ottimale. Per dire, con una densità ottica di 0,8 si arriva ad un volume di oltre 900 ml.
Ovviamente solo andando oltre l'unità, il valore del volume diminuisce.
Ma a proposito di questo, in base alla legge di Lambert-Beer, valori di assorbanza superiori all'1, dovrebbero perdere la correlazione con la legge e quindi risulterebbero valori non reali. Corretto?
Grazie mille per l'aiuto.
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La vita e i sogni sono fogli di uno stesso libro. Leggerli in ordine è vivere, sfogliarli a caso è sognare. (Arthur Schopenhauer)& |
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domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
 Inserito il - 20 maggio 2015 : 01:35:52
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Comincio col dire che non so la risposta.
Può essere che sia semplicemente per dire:"Se si fanno pochi batteri, crescine di più"?!
Nel senso, una coltura di batteri ON dovrebbe andare "a confluenza", ora non so quanto sia l'OD dei batteri a confluenza, ma sicuro è superiore ad 1 (Lo so perchè a volte mi servivano batteri a 0.4, li ho dimenticati a crescere ed avevano abbondantemente superato l'1).
Se hai messo a crescere dei batteri ON e il giorno dopo li hai a 0.8 sono molto lenti. Forse per compensare questo ti fanno mettere un volume maggiore di terreno, in modo da avere più batteri?!
Non so se è questa la risposta giusta.
Se così fosse immagino il kit consigli anche di fare un inoculo maggiore, altrimenti avresti una fase di latenza più lunga e potresti trovarti addirittura meno batteri.
Che ne pensi? |
Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato... |
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là
Utente Junior
565 Messaggi |
Inserito il - 20 maggio 2015 : 14:40:58
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| Io non ho mai fatto Maxiprep, ma Midiprep della Quiagen. E preparo 100ml-200ml a seconda del mio plasmide. Dopodichè lascio crescere O/N e basta, il giorno dopo estraggo il DNA. |
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Geeko
Utente
Città: Milano
1043 Messaggi |
 Inserito il - 21 maggio 2015 : 13:54:21
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 Scritto da MolecularLab Mobile
È proprio come ha suggerito Domi ;) |
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Assorbanza e crescita batterica
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