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camilla92
Nuovo Arrivato
2 Messaggi |
 Inserito il - 08 marzo 2018 : 10:53:07
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Buongiorno! sono una studentessa del primo anno di biotecnologie vegetali, tra una settimana avrò un esame e ho dei forti dubbi su queste due tecniche,la REAL TIME PCR e la RT PCR, sono entrambe analisi di espressione? è sbagliato come le ho intese io, ovvero:
parlando di vegetali, se devo analizzare l'espressione di un gene (in seguito ad esempio ad un trattamento) di cui non conosco la sequenza,la RT-PCR devo farla prima della REAL TIME utilizzando dei primer degenerati( costruiti su sequenze omologhe di piante vicine evolutivamente) , per poi in seguito effettuare una REAL TIME utilizzando questa volta primer altamente specifici?
grazie in anticipo a tutti quelli che mi risponderanno!!
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domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
Inserito il - 09 marzo 2018 : 13:46:55
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Non sono Citazione:
entrambe analisi di espressione
La RT PCR (RT sta per retrotrascrizione), ed e' quella tecnica che ti permette di convertire l'RNA in cDNA, utilizza dei primer degenerati perche' permette di copiare tutto l'RNA, e va fatta tutte le volte che vuoi convertire l'RNA in cDNA, se vuoi ad esempio clonare un RNA messaggero (o ovviamente prima di una REAL TIME PCR)
La REAL TIME PCR (o QPCR Q sta per quantitative) invece permette di valutare l'espressione vera e propria, e richiede primer specifi per i geni che vuoi quantificare.
Se quindi vuoi quantificare dei trascritti (RNA) devi prima retrotrascrivere con la RT-PCR e poi quantificare con la REAL TIME PCR.
Se invece vuoi valutare il numero di copie geniche di un gene, siccome e' gia' DNA, fai direttamente la REAL TIME PCR.
Spero sia chiaro.
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REAL TIME PCR e RT-PCR
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