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vero84
Nuovo Arrivato

Prov.: PO
Citt�: Prato

19 Messaggi

Inserito il - 06 settembre 2007 : 10:16:39

ciao....l'esame di ingegneria genetica incombe e nn sn ancora riuscita a capire cosa sia e a cosa serve l tecnica in oggetto

.....spero ci sia qualcuno che mi possa aiutare

grazie

Veronica

Giuliano652
Moderatore

Prov.: Brescia

6941 Messaggi

Inserito il - 06 settembre 2007 : 11:52:33

Qui c'� una spiegazione

http://www.vialattea.net/esperti/php/risposta.php?num=4944

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vero84
Nuovo Arrivato

Prov.: PO
Citt�: Prato

19 Messaggi

Inserito il - 21 settembre 2007 : 17:51:50

CIAO! spero sia utile a qualcuno....ringrazio il prof che me l'ha spiegato non so quante volte...ciao!!!

Ps:speriamo sia chiaro...so di nn essere una forza in italiano...ma ho fatto il possibile x risultare chiara

Immagine:

34,01 KB

La complementazione puo' essere dovuta o all'introduzione di un vettore HIS funzionante nella cellula, oppure perche' la cellula � retromutata.

Nota all'allegato:
Semino le cellule su un terreno contenete AMP e HIS e vedro' che cresceranno tutte quelle che contengono un plasmide (perche' ha la resistenza all'AMP).Quindi faccio una replica in una piastra che contiene AMP ma NON HIS, in questa cresceranno tutte quelle cellule capaci di farsi HIS (o quelle retromutate o quelle complementate).
Per vedere se sono retromutate o complementate devo togliere il plasmide senza uccidere la cellulae questo lo faccio con la tecnica del CURING (aggiungo Arancio di Acridina che si intercala tra le basi del DNA sia plasmidico che cromosomico bloccando la replicazione).A questo punto ottengo una miscela di cellule senza plasmide(alcune avranno cmq il plasmide anche se la maggioranza ne sara' priva che vado a seminare in un terreno contenente HIS ma non AMP (altrimenti morirebbero tutte).Adesso faccio una replica in terreno sia con HIS che con AMP dove cresceranno solo quelle che hanno UN plasmide.Poi faccio una nuova replica (dalla piastra del curing) in un terreno che NON ha NE' AMP NE' HIS e potro' avere due diversi risultati:
1- se mi cresceranno le stesse colonie della piastra (+amp e +his) allora quelle cellule sono COMPLEMENTATE
2- se invececresceranno tutte (quindi avro' una piastra identica a quella che ho fatto dopo il curing con +his e -amp) le cellule sono RETROMUTATE