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annamaria_mi
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Prov.: Milano
Città: milano
18 Messaggi |
 Inserito il - 31 marzo 2008 : 18:09:07
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ciao,ho scritto qlc gg fa nella sezione Biologia molecolare, ma sn nuova e non vorrei avere sbagliato..ci riprovo scrivendo qui!!aiutatemi!!
qualcuno di voi saprebbe dirmi come si usa il kit di dosaggio proteico della Biorad "DC protein assay"..al di là della procedura da manuale, vorrei sapere se qlc di voi lo utilizza per dosaggi in cuvette normali (da 3-3,5 ml) (e se ha rivisitato il protocollo), perchè io dovrei utilizzarlo in questo modo ma nel manuale parla solo di microplates da 96 o provettoni e non vorrei che modificando i volumi sballi tutto! fino ad ora ho sempre usato il metodo bradford molto piu semplice ma anche piu impreciso, qst kit si basa sul metodo Lowry invece..e nn so che fare!!
grazie
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 31 marzo 2008 : 22:38:27
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Io lo uso nelle microplates da 96, ma visto che il protocollo per "provettoni" e microplates è identico e i volumi sono esattamente scalari, non vedo perché non dovrebbe funzionare nelle cuvette normali!
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annamaria_mi
Nuovo Arrivato
Prov.: Milano
Città: milano
18 Messaggi |
Inserito il - 01 aprile 2008 : 14:13:05
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| è quello che pensavo anch'io, ma i dosaggi che mi vengono fuori sono completamente differenti da quelli che risultano usando il buon vecchio Biorad..da li nasce il mio dubbio..è perchè è più preciso(ma non sarebbero cosi differenti)..o c'è qualcosa che sballa?? |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 01 aprile 2008 : 19:36:55
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Beh riguardo ai metodi di quantificazione delle proteine... ci sono tanti "se" e "ma"...
Metodi diversi non danno lo stesso risultato perchè sono basati su principi diversi... ad es. il metodo di Lowry oltre al legame peptidico riconosce anche catene laterali di Tyr, Trp e Cys...
poi dipende dallo standard che utilizzi, ad es. la albumina è meglio delle immunoglubuline per per il Bradford... ecc...
Se ti interessa qua trovi un po' di info: Protein Assays
Comunque devi vedere se le differenze tra i due metodi sono veramente così elevate, com'è la curva dello standard e dove ricadono i valori.
Ad es. a me facendo diluizioni dello stesso campione (utilizzando il kit DC Biorad) mi vengono spesso valori completamente diversi!!! (con lo stesso metodo e sulla stessa piastra!!!) Considero più affidabili i valori che ricadono nella parte della curva in cui c'è più liearità (solitamente almeno nel mio caso, la parte centrale della curva)
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Dc protein assay della biorad
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