| Autore |
Discussione |
|
|
Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
 Inserito il - 14 giugno 2008 : 20:54:17
|
finalmente ho un po' di tempo per sguazzare nel forum con tranquillità!!! volevo però chiedervi una cosa sui gel di acrilamide. io ho sempre colato il running per poi fare il fronte del gel (prima di colare lo stacking) usando etanolo al 20%. appena il running era polimerizzato, buttavo l'etanolo e lavavo con tris pH 6.8 Dove sto lavorando ora, invece, fanno il fronte con acqua, il che comporta una maggiore attenzione per versare con molta cautela l'acqua ed evitare che si mischi con la soluzione di acrilamide non ancora polimerizzata. l'etanolo invece mi dava la possibilità di versarlo più rapidamente e senza preoccupazioni, dal momento che essendo più leggero, in soluzione tende a risalire. secondo voi l'etanolo è da evitare?
|
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
|
|
|
|
|
Schuldiner86
Utente Junior
Prov.: Viterbo
Città: Bologna
581 Messaggi |
Inserito il - 14 giugno 2008 : 21:23:07
|
| Anche dove sono stato a fare tirocinio io dopo aver colato il running mettevano l'acqua...Lo facevano con una P1000 e la versavano molto delicatamente per evitare buchi nel gel... |
 
 |
 |
|
|
Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 15 giugno 2008 : 11:34:32
|
Da quanto mi risulta usare etanolo, isopropanolo, butanolo o acqua è assolutamente indifferente.
A mio avviso gli alcoli potrebbero essere più utili per rompere le 'bolle' visto che hanno
un maggiore potere tensioattivo, ma bisogna usarne solamente 'un filo' (due gocce sono più
che sufficienti, se il bancone è in piano) per evitare che richiamino troppa acqua dal gel. |
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
|
|
|
|
Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 15 giugno 2008 : 11:57:35
|
Ah, fonti vicine (spiritosissime) mi suggeriscono di usare i gel precasted così non ti poni il problema
 |
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
|
|
|
|
nyo84
Utente Junior
Prov.: Brescia
Città: Piancogno
239 Messaggi |
Inserito il - 15 giugno 2008 : 13:12:33
|
anche noi usiamo acqua...bisogna pipettarla con un po' di delicatezza..ma è una cosa tranzolla...ahahahahah  |
Fai attenzione quando leggi libri di medicina..potresti morire per un
errore di stampa... |
|
|
|
Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 15 giugno 2008 : 13:17:17
|
Citazione:
Messaggio inserito da nyo84
tranzolla
da quello che dice dionysos, credo che continuerò ad usare il mio vecchio caro etanolo 
comunque è vero che sono utilissimi per evitare le bolle, ed è anche vero che ne vanno messe minime quantità, anche perchè metterne troppo significa "appesantire" il gel sottostante e non avere una buona polimerizzazione.
|
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
|
|
|
|
Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 15 giugno 2008 : 13:18:24
|
Citazione:
Messaggio inserito da Dionysos
Ah, fonti vicine (spiritosissime) mi suggeriscono di usare i gel precasted così non ti poni il problema
pensa tu, io mi preparo addirittura l'acrilamide dalle polveri!!! |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
|
|
|
|
Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 15 giugno 2008 : 15:40:38
|
Citazione:
pensa tu, io mi preparo addirittura l'acrilamide dalle polveri!!
Allora io e te (diversamente da qualche fortunello) siamo nella stessa barca rattoppata.
Respect |
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
|
|
|
|
domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
|
|
Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 15 giugno 2008 : 17:15:57
|
Da noi a BS li usa un reparto su dieci (il più finanziato).
Tutti gli altri fanno i gel con le polveri o, al limite,
alcuni prodotti acquistati (TEMED, soluzione di acrilamide
bisacrilamide) e tutto il resto in polvere.
Quando sono stato al Dibit del san raffa a trovare una mia
conoscente, nel suo lab mi han detto che usavano i precasted
solo per certi tipi di esperimenti, mentre per quelli meno
importanti preferivano economizzare pure loro.
|
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
|
|
|
|
GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 16 giugno 2008 : 01:04:20
|
Beh dipende anche dalla quantità che viene consumata, comunque la maggior parte se li fanno da soli!
Ma almeno la soluzione di acrilamide/bis acrilamide noi la compriamo già pronta! Dai mica inciderà così tanto sul costo rispetto alle polveri!
Comunque c'è stato un periodo in cui nel mio labo andavano di moda i gel "pre-cast", nel senso che qualcuno... ( ... io ovviamente!)... li faceva in gran quantità e venivano bene... e il resto del labo ne usufruiva! 
Ma ritornando alla domanda "acqua o alcoli"... ogni laboratorio ovviamente ha le sue "usanze", io trovo comodo il butanolo, ma alla fine a parte utilizzare maggiori precauzioni per versare l'acqua non penso cambi molto!
|
|
|
|
ale83t
Nuovo Arrivato
Prov.: Ferrara
Città: Ferrara
21 Messaggi |
Inserito il - 16 giugno 2008 : 12:15:29
|
| io di usare etanolo non ne avevo mai sentito parlare...sempre usato acqua e i gel vengono bene...pure io mi faccio tutti i gel ma almeno con la soluzione di acrilammide/bis acrilammide già pronta...altrimenti mi si bruciano i pochi neuroni rimasti!!! |
|
|
|
Eleo
Nuovo Arrivato
Prov.: Pavia
89 Messaggi |
Inserito il - 19 giugno 2008 : 14:21:50
|
acqua sopra il running versata delicatamente con una pasteur.
per i gel io li ho sempre preparati, avevo però l'acrilammide già in soluzione e il temed, tutto il resto era preparato dalle polveri.
Ora uso gel a gradiente precasted per i miei esperimenti, si preferisce così per uniformare gli esperimenti.
Certo dipende dai finanziamenti che uno ha, sono fortunata, mi comprano persino il running buffer 10X in bottiglie e i puntali già in scatola!
(a parte questa cosa penso che a menochè un lab non abbia davvero decine di fondi, penso che i soldi vadano spesi meglio, penso che sia inutile prendere gel precasted e tamponi già pronti e poi lamentarsi delle eccessive spese se si fa richiesta di un anticorpo in più o un alimentatore in più)
ciao
|
|
|
|
darkene
Utente Junior
291 Messaggi |
Inserito il - 19 giugno 2008 : 20:15:17
|
| isopropanolo tutta la vita! |
|
|
| |
Discussione |
|
fronte gel di acrilamide
Didattica e Relazioni
