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Autore

Discussione

Miche
Nuovo Arrivato

1 Messaggi

Inserito il - 14 febbraio 2009 : 22:21:05

Ciao a tutti, quacuno di voi sa dirmi se una volta fissate le cellule con metanolo posso tenerle in frigo tutta la notte e riprendere l'esperimento il giorno dopo? L'anticorpo primario conviene tenerlo 1 h a 37�C in camera umida o tutta la notte a 2�C?
Miche

Luis 22
Utente

Citt�: Bari

755 Messaggi

Inserito il - 15 febbraio 2009 : 13:12:10

Io le fissavo con metanolo-acetone (1:1) per 20 minuti e poi le trattavo con formaldeide (4% e poi 1% o direttamente 1%) e lasciavo over-night.
Il primario invece l'ho sempre tenuto over-night.

La vita e i sogni sono fogli di uno stesso libro. Leggerli in ordine � vivere, sfogliarli a caso � sognare. (Arthur Schopenhauer)&

nyo84
Utente Junior

Prov.: Brescia
Citt�: Piancogno

239 Messaggi

Inserito il - 15 febbraio 2009 : 13:26:27

io le fisso solo con formaldeide 4% per mezz'ora se non ricordo male..il primario sempre over-night..

Fai attenzione quando leggi libri di medicina..potresti morire per un
errore di stampa...

Dionysos
Moderatore

Citt�: Heidelberg

1913 Messaggi

Inserito il - 15 febbraio 2009 : 14:49:46

Io invece il primario l'ho sempre tenuto per un'ora

Volere libera : questa � la vera dottrina della volont� e della libert�
(F.W. Nietzsche)

Less Jim Morrison, more Sean Morrison!

Iside
Utente Attivo

Citt�: Napoli

1375 Messaggi

Inserito il - 16 febbraio 2009 : 10:50:40

dopo la fissazione (con metanolo, paraformaldeide o quant'altro) io le lascio in PBS ON a 4�C e continuo il giorno dopo. per l'anticorpo dipende da come � suggerito nel data sheet, alcuni Ab li lascio ON a 4�C mentre altri li tengo 1 ora a RT ma sempre in camera umida.

...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...

Eleo
Nuovo Arrivato

Prov.: Pavia

89 Messaggi

Inserito il - 10 marzo 2009 : 11:04:33

anche io lascio se necessario a 4�C in PBS i vetrini dopo averli fissati (sia usando formaldeide che PFA che metanolo che acetone.
Per quanto riguarda l'uso dell'anticorpo, beh dipende dall'anticorpo stesso, dalle prove che ho fatto in precedenza e dalla fretta o meno di avere un risultato. Alcuni consigliano 37�C per 1 ora in camera umida, altri 4�C O/N. Consiglio sempre per un anticorpo nuovo di fare sempre una prova sia per i tempi di incubazione che per la diluizione ottimale sia per l'utilizzo della tecnica di fissaggio ed eventuale permeabilizzazione delle membrane.