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Miche
Nuovo Arrivato
1 Messaggi |
 Inserito il - 14 febbraio 2009 : 22:21:05
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Ciao a tutti, quacuno di voi sa dirmi se una volta fissate le cellule con metanolo posso tenerle in frigo tutta la notte e riprendere l'esperimento il giorno dopo? L'anticorpo primario conviene tenerlo 1 h a 37°C in camera umida o tutta la notte a 2°C?
Miche
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Luis 22
Utente
Città: Bari
755 Messaggi |
 Inserito il - 15 febbraio 2009 : 13:12:10
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Io le fissavo con metanolo-acetone (1:1) per 20 minuti e poi le trattavo con formaldeide (4% e poi 1% o direttamente 1%) e lasciavo over-night.
Il primario invece l'ho sempre tenuto over-night. |
 
La vita e i sogni sono fogli di uno stesso libro. Leggerli in ordine è vivere, sfogliarli a caso è sognare. (Arthur Schopenhauer)& |
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nyo84
Utente Junior
Prov.: Brescia
Città: Piancogno
239 Messaggi |
Inserito il - 15 febbraio 2009 : 13:26:27
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| io le fisso solo con formaldeide 4% per mezz'ora se non ricordo male..il primario sempre over-night.. |
Fai attenzione quando leggi libri di medicina..potresti morire per un
errore di stampa... |
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 15 febbraio 2009 : 14:49:46
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Io invece il primario l'ho sempre tenuto per un'ora
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Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 16 febbraio 2009 : 10:50:40
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dopo la fissazione (con metanolo, paraformaldeide o quant'altro) io le lascio in PBS ON a 4°C e continuo il giorno dopo. per l'anticorpo dipende da come è suggerito nel data sheet, alcuni Ab li lascio ON a 4°C mentre altri li tengo 1 ora a RT ma sempre in camera umida.
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...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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Eleo
Nuovo Arrivato
Prov.: Pavia
89 Messaggi |
Inserito il - 10 marzo 2009 : 11:04:33
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anche io lascio se necessario a 4°C in PBS i vetrini dopo averli fissati (sia usando formaldeide che PFA che metanolo che acetone.
Per quanto riguarda l'uso dell'anticorpo, beh dipende dall'anticorpo stesso, dalle prove che ho fatto in precedenza e dalla fretta o meno di avere un risultato. Alcuni consigliano 37°C per 1 ora in camera umida, altri 4°C O/N. Consiglio sempre per un anticorpo nuovo di fare sempre una prova sia per i tempi di incubazione che per la diluizione ottimale sia per l'utilizzo della tecnica di fissaggio ed eventuale permeabilizzazione delle membrane. |
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Immunofluorescenza
Didattica e Relazioni
