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masi
Nuovo Arrivato
43 Messaggi |
 Inserito il - 20 giugno 2009 : 11:00:11
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Buongiorno a tutti, qualcuno può suggerirmi una tecnica per misurare i livelli di calcio intracellulari? Non mi serve ottenere un valore assoluto ma ho bisogno di fare un confronto tra un controllo e un trattato.
Grazie mille
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 21 giugno 2009 : 10:34:07
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Direi che la soluzione più comunemente usata è fare del calcium imaging.
Carichi le cellule con un opportuno colorante come ad es. Calcium Green, Fura-2, Fluo-3, Indo-1... ce ne sono molti! Probabilmente il più usato è il Fura, ma dipende un po' da che microscopio hai. Il fura ad es. è un indicatore raziometrico, quindi ti serve eccitarlo a 2 diverse lunghezze d'onda (340nm e 380nm), quindi se vuoi fare le cose bene ti serve un sistema che possa fare uno switch veloce fra le due lunghezze d'onda (es. un sistema equipaggiato di Lambda DG-4). Altri coloranti non raziometrici, invece, possono essere usati con una sola coppia eccitazione/emissione.
Ad ogni modo se il controllo ed il trattato sono ad es. 2 colture differenti NON puoi confrontarle a meno di non fare una cosa quantitativa. Questo perchè non puoi essere certo che ad es. il colorante sia stato caricato uniformemente in tutte le cellule e in controlli e trattati. Quindi hai 2 opzioni:
1) fai una misura quantitativa e confronti i valori assoluti di [Ca2+]
2) fai il trattamento durante l'esperimento di calcium imaging e vedi il cambiamento in realtime, che secondo me è la cosa migliore da fare.
Conta che ad ogni modo non è una tecnica che metti a punto in 2 giorni... soprattutto per l'analisi dei risultati.
Un libro con consigli pratici molto utili che ti consiglio è: Imaging in neuroscience and development di Yuste e Konnerth. |
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masi
Nuovo Arrivato
43 Messaggi |
Inserito il - 01 luglio 2009 : 14:33:03
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| scusa per il ritardo nel ringraziamento! In realtà conosco un gruppo che fa questo tipo di lavoro ma al momento non mi può aiutare quindi speravo di trovare una soluzione più semplice. |
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livelli di calcio intracellulari
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