Ciclo Soglia e Curva Standard (Real Time PCR)

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omega3
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38 Messaggi

Inserito il - 17 luglio 2009 : 22:42:15

Grazie alla Real Time PCR � possibile quantizzare la concentrazione iniziale di DNA e RNA

Faccio partire la reazione di PCR, e i macchinari mi riportano il ciclo di soglia, ovvero il ciclo della reazione dove � stato superato il valore soglia, quindi � appena entrata nella fase esponenziale.

Maggiore � la concentrazione iniziale, minore sar� il valore di ciclo soglia perch� la reazione avr� bisogno di meno tempo per raggiungere la fase esponenziale.

Poi qui mi sono bloccato, come si fa a risalire all'esatta concentrazione iniziale di DNA o RNA con la curva standard?

angemore
Nuovo Arrivato

82 Messaggi

Inserito il - 18 luglio 2009 : 12:55:49

Tu hai la curva standard di cui conosci l'esatta concentrazione punto per punto e sai inoltre che a quella data concentrazione il ciclo soglia ha un determinato valore . I valori vengono poi riportati in un grafico tipo questo:

supposto che l'amplificazione dello standard e del campione a concentrazione sconosciuta siano avvenute con la stessa efficienza, sapendo il Ct del campione a concentrazione ignota puoi risalire per estrapolazione alla sua concentrazione.