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GFAP
Nuovo Arrivato

18 Messaggi

Inserito il - 14 luglio 2009 : 15:17:11

Salve a tutti! Qualcuno sa come analizzare le foto di immunofluorescenza di colture cellulari? mi spiego meglio: devo valutare l'intensit� del colore ed ottenere dati per un 'analisi statistica.(magari con imagej..)

grazie

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 15 luglio 2009 : 08:43:23

Allora, la questione � tutt altro che banale.
Personalmente sono molto cauto quando si vuole fare un analisi statistica di un'immuno perch� l'intensit� del colore � influenzata da molti parametri.

Quindi innanzitutto tieni a mente che:
1) non ha senso comparare esperimenti diversi in valore assoluto. Dovrai rapportare il tutto alla % del controllo in ciascun esperimento
2) devi prendere le immagini esattamente con gli stessi settaggi della camera, altrimenti l'intensit� sar� falsata (es. se cambi gain tra il controllo e il trattato). Inoltre non � una buona idea prendere le immagini al microscopio a epifluorescenza (piuttosto un confocale).
3) devi sempre tenere a mente il fatto che l'immunofluorescenza non � necessariamente una tecnica quantitativa. Essendo le tue colture cellulari in generale avrai dei risultati pi� facili da analizzare che l'immunofluorescenza su tessuto che decisamente invece non � quantitativa.

Per quanto riguarda l'analisi con imageJ puoi provare a usare i plugins di shapelogic
http://www.shapelogic.org/

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GFAP
Nuovo Arrivato

18 Messaggi

Inserito il - 22 luglio 2009 : 10:21:40

GRAZIE. SAi per caso come si usa shapelogic? non riesco a capire come impostare i parametri (max distance ecc..) Devo fargli fare la conta cellulare di astrociti(cio� un unico tipo di cellula) ed una qualche quantificazione del colore di immunofluorescenze...