Forum

Nome Utente:
Password:
Riconoscimi automaticamente
 Tutti i Forum
 MolecularLab
 Tecniche
 ligazione
 Nuova Discussione  Nuovo Sondaggio Nuovo Sondaggio
 Rispondi Aggiungi ai Preferiti Aggiungi ai Preferiti
Cerca nelle discussioni
I seguenti utenti stanno leggendo questo Forum Qui c'è:

Aggiungi Tag Aggiungi i tag

Quanto è utile/interessante questa discussione:

Autore Discussione  

federico
Nuovo Arrivato



5 Messaggi

Inserito il - 04 agosto 2004 : 11:08:46  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di federico Invia a federico un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti, ho un grosso problema.
Non riesco a ottenere la ligazione tra un plasmide EGFP e un inserto di 500bp. Ho fatto tute le verifiche: siti restrizione, T4, concentrazioni. L'unica cosa che sono riuscito ad ottenere è stata una colonia che ha il mio inserto ma che crwce a una concentrazione di Kanamicina di 5ug/ml rispetto ai 30ug/ml con cui cresceva il plasmide EGFP da solo, e non riesco ad ottenerne in quantità tale da fare poi le analisi. EGFP ha lo stessa origine di replicazione del pUC, quindi è ad alto numero di copie.
Come posso fare?

terreno85
Utente Junior




235 Messaggi

Inserito il - 01 settembre 2009 : 19:51:37  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di terreno85 Invia a terreno85 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
mmm bhe inizia a fare un sequenziamento del plsmide possibile che abbia qualche mutazione nei siti di restizioni che hai utilizzato..

Una teoria può esserre provata da un esperimento. Ma nessun percorso guida dall'esperimento alla nascita di una teoria
Torna all'inizio della Pagina

Dionysos
Moderatore

D

Città: Heidelberg


1913 Messaggi

Inserito il - 01 settembre 2009 : 19:56:40  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dionysos  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Dionysos Invia a Dionysos un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Altrimenti ci sono i vettori di clonaggio easy
(pGEM, pCR-TOPO, ecc.) che ti potrebbero aiutare
se amplifichi il frammento tramite Taq. Una volta
infilato il tuo inserto dentro di quelli, puoi
ri-tagliarli, in modo più affidabile, e trasferire
il nuovo inserto nel tuo plasmide di destinazione.

Citazione:
una colonia che ha il mio inserto ma che crwce a una concentrazione di Kanamicina di 5ug/ml rispetto ai 30ug/ml con cui cresceva il plasmide EGFP da solo, e non riesco ad ottenerne in quantità tale da fare poi le analisi


Questa proprio non l'ho capita! per quale strano
motivo al mondo una colonia non ti basterebbe?

Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)

Less Jim Morrison, more Sean Morrison!


Torna all'inizio della Pagina
  Discussione  

Quanto è utile/interessante questa discussione:

 Nuova Discussione  Nuovo Sondaggio Nuovo Sondaggio
 Rispondi Aggiungi ai Preferiti Aggiungi ai Preferiti
Cerca nelle discussioni
Vai a:
MolecularLab.it © 2003-18 MolecularLab.it Torna all'inizio della Pagina