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Discussione |
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SDSone
Nuovo Arrivato
Prov.: si
Città: siena
17 Messaggi |
 Inserito il - 29 ottobre 2009 : 10:52:03
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Ciao a tutti sono alla ricerca di vaschette adatte ad immunoblotting di dimensioni 9x13 cm. in nessun catalogo di ditte specializzate sono riuscito a trovare niente (BioRad, GE,ecc...)
qualcuno potrebbe darmi una mano.
grazie
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 29 ottobre 2009 : 12:25:04
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Guardati intorno! Si possono trovare benissimo vaschette delle varie dimensioni nella vita quotidiana! 
Io ho portato in laboratorio un sacco di scatoline di tutti i generi.
Un'altra alternativa nel caso non trovassi niente o mentre sei alla ricerca è farti le scatoline su misura utilizzando un pezzo di parafilm, pieghi i bordi e lo fai diventare una vaschetta.
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SDSone
Nuovo Arrivato
Prov.: si
Città: siena
17 Messaggi |
Inserito il - 29 ottobre 2009 : 13:42:52
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avevo pensato anche a questo ma non conosco il comportamento degli anticorpi a contatto con della plastica non idonea!!!
grazie dell'idea del parafilm |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 29 ottobre 2009 : 14:10:27
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La plastica "normale" va benissimo per gli anticorpi.
Io di laboratori ne ho girati molti e sinceramente non ho mai visto scatolette apposta, ma le più svariate vaschette di plastica o vetro: scatoline dei puntali, scatoline dei vetrini, scatoline portate da casa... di tutto di più...
e mai nessuno ha avuto problemi con gli anticorpi!
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tiz83
Nuovo Arrivato
Città: smallville
72 Messaggi |
Inserito il - 29 ottobre 2009 : 21:36:20
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| ciao noi prendiamo anche le vaschette dei gelati....o quelli x il microonde...altrimenti i blot li puoi fare sul banco sul parafilm.ciao ciao |
Non c'è immensità che valga quanto abbiamo vissuto.
Pablo Neruda |
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 30 ottobre 2009 : 00:14:00
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| Quelle per le diapositive sono le migliori!! :D |
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
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SDSone
Nuovo Arrivato
Prov.: si
Città: siena
17 Messaggi |
Inserito il - 02 novembre 2009 : 10:24:20
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Grazie a tutti. Ho risolto. uso i coperchi delle scatole dei puntali, ho trovato diversi protocolli che utilizzano queste vaschette.
ciao |
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ido82
Nuovo Arrivato
Prov.: tp
Città: trapani
4 Messaggi |
Inserito il - 04 novembre 2009 : 14:00:11
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salve a tutti
avrei un problemino con le anti fosfatasi che abitualmente usiamo in lab quando dobbiamo blottare alla ricerca di prot fosforilate
le ultime western per akt-p e erk-p di campioni freschi di controlli positivi che ci aspettavamo dessero un forte segnale, non hanno dato segnale; a cospetto di vecchi campioni che invece hanno dato segnale anke se + flebile del previsto...
la procedura utilizzata è ovviamente la stessa...
così abbiamo pensato che siano state le anti-fosfatasi a nn funzionare +.
domanda:
COME FACCIAMO AD ESSERE SICURI IN MANIERA ASSOLUTA CHE NON FUNZIONANO +, SENZA ORDINARNE SUBITO DELLE ALTRE?
noi avremmo pensato di confrontare i risultati di 2 western in parallelo con gli stessi controlli positivi preparati di fresco con le vecchie aliquote di anti-fosfatasi "di dubbia efficenza";
e ancora, preparati con anti-fosfatasi di qualche altro lab che ci assicuri la loro buona efficenza.
QUALCUNO HA UNA IDEA MIGLIORE, O + SEMPLICE?
GRAZIE
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SDSone
Nuovo Arrivato
Prov.: si
Città: siena
17 Messaggi |
Inserito il - 04 novembre 2009 : 15:03:20
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è molto probabile che le anti-fosfatasi per qualche motivo si siano scassate a volte capita anche mantenendo tutto nelle migliori condizioni.
a me è capitato con un ab anti-tubulina, sempre funzionato benissimo, e all'inprovviso stop.
spero di esserti stato d'aiuto. |
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ido82
Nuovo Arrivato
Prov.: tp
Città: trapani
4 Messaggi |
Inserito il - 05 novembre 2009 : 10:44:45
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Grazie della risp SDSone...
cmq abbiamo pensato che possa essere colpa (almeno speriamo) non delle antifosf. ma del tipo di estrazione con RIPA SDS 0,5% +ttosto che con RIPA SDS 0,1%.
Si era provato così per estrarre + proteine di membrana possibile, ma probabilmente questo interferisce non poco con la fosforilazione...
se ti interessa ti faccio sapere come è finita.
GRAZIE ANCORA |
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SDSone
Nuovo Arrivato
Prov.: si
Città: siena
17 Messaggi |
Inserito il - 05 novembre 2009 : 14:02:47
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| Grazie, sono curioso, fammi sapere!!!! |
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Gst
Utente Junior
Prov.: Roma
Città: Ariccia
143 Messaggi |
Inserito il - 08 novembre 2009 : 13:43:20
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Scusa ido82, ma il fatto ke nel primo WB che hai effettuato i tuoi conttrolli positivi erano deboli, a me fa pensare a qualke problema al WB, non alle antifosfatasi (ammesso ke io abbia capito bene e cn le anti-fosfatasi ci tratti il campione, giusto? NON intendi l'anticorpo ke usi per WB, vero?).
Se non ho capito nulla... corregimi tranquillamente eh. 
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Ascoltami con gli occhi... |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 08 novembre 2009 : 14:19:02
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Scusate ma al massimo saranno gli inibitori delle proteasi a essere non più funzionali.
Dubito che il sodio ortovanadato e il sodio fluoruro (inibitori delle fosfatasi) scadano. |
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