TBS e TWEEN 20

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Discussione

coccinellas
Utente Junior

Citt�: l'isola che non c'�

138 Messaggi

Inserito il - 13 novembre 2009 : 19:32:12

Salve ragazzi, mi sapete spiegare perch� in alcuni protocolli per western il TBS � preparato con tween 20 ed in altri no? Da cosa dipende??
Grazie

angemore
Nuovo Arrivato

82 Messaggi

Inserito il - 14 novembre 2009 : 09:18:35

Il tween � un detergente e si usa di solito nei western per blot per lavare via eventuali legami aspecifici che si formano tra l'anticorpo e le proteine. Ci� ti permette di diminuire molto il background e di rendere pi� chiaro il segnale.
Per farti un esempio, io uso di solito il tween allo 0.005% quando faccio i lavaggi di un western in cui ho una proteina molto espressa per avere un segnale pi� pulito. Anni fa invece, ho dovuto eliminare il tween e sostituire il TBS con il PBS perch� avevo una proteina poco espressa e volevo rendere meno stringenti le condizioni di lavaggio.
Bisogna tenere conto non solo dell'espressione della tua proteina ma anche ad esempio dell'Ab che usi (se usi un goat di solito il segnale � pi� sporco e si usa il tween nei lavaggi, ecc..
Spero di essere stata chiara

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 14 novembre 2009 : 11:01:45

Piccolissima puntigliosa precisazione: se dici TBS allora intendi senza Tween.
Quando includi il Tween lo chiami TBS-T (o TBS-Tween)

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coccinellas
Utente Junior

Citt�: l'isola che non c'�

138 Messaggi

Inserito il - 15 novembre 2009 : 11:52:47

Grazie ,siete stati chiarissimi.
Un collega mi diceva che il TBS-T si usa solo nell'ECL , e poich� io uso NTB/BCIP per la rivelazione mi consigliava di non usare il semplice TBS. Quindi non � proprio esatto questo consiglio?

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 15 novembre 2009 : 17:17:48

Citazione:
Messaggio inserito da coccinellas

Un collega mi diceva che il TBS-T si usa solo nell'ECL

concordo che il tween � importante per i lavaggi.
Inoltre io sapevo che pu� interferire con l'ECL (o similari) � quindi consigliato prima di mettere l'ECL fare l'ultimo lavaggio in TBS e non TBS-T.