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rodopsina
Nuovo Arrivato
8 Messaggi |
 Inserito il - 10 gennaio 2010 : 18:58:41
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ciao a tutti!
qualcuno mi sa dire perchè la pcr nested aumenta anche la sensibilità oltre alla specificità?
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 10 gennaio 2010 : 19:46:57
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| Beh perchè amplifichi "l'amplificato", quindi anche se è poco lo stampo iniziale e dopo la prima PCR non vedi bene il prodotto su gel, amplificandolo ulteriormente ne aumenti di molto la quantità e lo riesci a vedere, quindi aumenti la sensibilità. |
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rodopsina
Nuovo Arrivato
8 Messaggi |
Inserito il - 13 gennaio 2010 : 00:58:19
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| grazie millee!!!!!!!! in effetti era semplice :) |
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Cècchicè
Nuovo Arrivato
23 Messaggi |
 Inserito il - 21 gennaio 2010 : 18:36:43
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scusate la curiosità.
Avete scritto che è più sensibile, cioè che è più sicura quando si hanno quantità particolarmente basse di targhet se non ho capito male; quindi il fatto che non si usino sempre gli stessi primer ci salvaguarda da errori vari che possono verificarsi alle estremità dei filamenti amplificati? Se si vorrei potrei sapere se alle estremità sono più frequenti errori e di che natura?
grazie  |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 21 gennaio 2010 : 20:23:36
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Citazione:
Avete scritto che è più sensibile, cioè che è più sicura quando si hanno quantità particolarmente basse di targhet se non ho capito male
No più "sensibile" non significa più "sicura"
Sensibile significa che è in grado di individuare anche "piccole quantità", cioè se hai tanto target lo vedi benissimo con una normale PCR, se è poco potresti non vederlo, ma riamplificandolo con una nested ti appare il segnale che prima non vedevi.
Il resto del tuo discorso non l'ho capito! Quali estremità?
Comunque sia quando fai una PCR hai uno stampo più lungo e amplifichi con dei primers che si legheranno all'interno della sequenza. Il fatto di fare una nested e quindi di fare una seconda amplificazione ti assicura il fatto (oltre alla sensibilità) che sia più "specifica", cioè se anche con la prima PCR i primers si fossero appaiati a qualche altra sequenza e avessero amplificato un prodotto aspecifico è praticamente impossibile che la seconda coppia di primers (disegnate sulla tua sequenza di interesse) possa legarsi anche al prodotto aspecifico amplificandolo ulteriormente, in questo modo amplificherà solo il prodotto specifico. |
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gavio
Nuovo Arrivato
7 Messaggi |
Inserito il - 09 marzo 2010 : 19:37:25
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praticamente impossibile che la seconda coppia di primers (disegnate sulla tua sequenza di interesse) possa legarsi anche al prodotto aspecifico amplificandolo ulteriormente???
per quale motivo?? |
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