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ritis
Nuovo Arrivato
17 Messaggi |
 Inserito il - 21 gennaio 2010 : 21:35:32
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Ciao a tutti, ma è norma comune riutilizzare piastre Real Time( chiaramente nei pozzetti vuoti nn utilizzati) semplicemente togliendo la pellicola. Non aumenta il rischio di contaminazione?
Ho anche un'altra curiosità: è importante l'uso di UNG (Uracil n-glicosilasi) nella fase iniziale?
Grazie in anticipo
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neurodue
Nuovo Arrivato
5 Messaggi |
Inserito il - 04 febbraio 2010 : 20:47:59
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| ehmmm... io non l'ho mai fatto e tanti che so che fanno real time non lo fanno... anche se usano pochi pozzetti... |
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silvietta82
Utente Junior
126 Messaggi |
Inserito il - 05 febbraio 2010 : 11:44:30
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Secondo me aumenta sì il rischio di contaminazione...certe piastre si possono tagliare...noi l'abbiamo fatto un paio di volte..es. tagli le prime due file, riempi quei pozzetti, tagli la pellicola...fai la PCR solo su quelle file e il resto della piastra lo utilizzi un'altra volta
Non so però se è possibile con tutte le piaste |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 05 febbraio 2010 : 12:46:34
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Si concordo il rischio di contaminazione è troppo alto, io non mi azzarderei mai a fare una cosa del genere!
Come dice silvietta82 esistono piastre che si possono tagliare (non tutte, ma ce ne sono varie), basta utilizzare quelle! |
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seabass
Nuovo Arrivato
25 Messaggi |
Inserito il - 11 marzo 2010 : 20:23:19
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anche io non l'ho mai fatto..
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cami
Utente Junior
Città: roma
136 Messaggi |
Inserito il - 12 marzo 2010 : 10:45:56
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nemmeno io... il rischio di contaminazione così secondo me è altissimo!!!! considera che nel nostro laboratorio capita spessissimo che ci siano problemi con i controlli negativi, nel senso che alcuni vengono negativi, altri si amplificano leggermente alla fine della reazione, quindi penso che a maggior ragione ti potrebbe capitare riutilizzando la stessa piastra..
a proposito, se posso aggiungere qualche domanda a questa discussione, che mi sembra pertinente... ma capita anche a voi di avere lo stesso mio problema (amplificazione in alcuni controlli negativi)? considerando che ho escluso la formazione di dimeri dei primers (melting perfetta, inoltre il picco del negativo sta proprio in corrispondenza degli altri, quindi ho una contaminazione nel pozzetto..) mi sapreste consigliare qualche sistema per evitarlo? ad esempio, voi passate le piastre agli UV?
infine... nel mio laboratorio abbiamo un apparecchio della BioRad, con il solo supporto per le piastre, ma per caso sapete se ci sono delle provette chiuse che si possono utilizzare anche con questo tipo di supporto? |
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 12 marzo 2010 : 19:29:20
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Da noi ci sono così tante confessioni che mi sento
di poter fare un'imbarazzante classifica, quantificando
il grado di paranoia da 1 a 8
1) gente che prepara le piastre sul bancone, senza "zappare",
le usa e quindi le ri-usa togliendo tutta la pellicola.
2) come 1, ma avendo cura perlomeno di coprire i pozzetti
non utilizzati al momento , sia prima che dopo.
3) come 2, ma avendo cura di "zappare" con la DNA zap
per eliminare la contaminazione dei plasmidi da bancone
4) gente che non si sognerebbe mai di rischiare così
tanto per non riutilizzare una piastra nuova, per cui
usa sempre piastre nuove e presta attenzione a zappare tutto.
5) gente che fa tutto ciò e pure tiene separati gli
ambienti (bancone Taqman, bancone plasmidi)
6) gente che fugge sotto una cappa PCR
ogni qual volta deve fare una Taqman
7) gente che tiene TUTTO (comprese le piastre e i puntali
e le PIPETTE) in doppia copia, di cui una da tenere sempre
e sotto la cappa PCR. Tutto zappato ogni volta, con profondo
orrore nei confronti del verbo "riutilizzare".
8) gente che pensa che se prepari le Taqman fuori
da una cappa PCR, nessuna misurazione sarà mai attendibile
e tutti quelli che non lo fanno sono matti o pasticcioni.
Citazione:
ma capita anche a voi di avere lo stesso mio problema (amplificazione in alcuni controlli negativi)?
Sì sempre.
In ogni caso a tutti i controlli negativi (NTC) amplificano
comunque qualcosina a cicli avanzati, non si capisce se è la
sonda Taqman che si spezza da sola (possibile) oppure se c'è
una qualche contaminazione ambientale ineliminabile. Boh.
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Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 12 marzo 2010 : 19:48:53
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La cosa bella è che poi in generale la riproducibilità degli esperimenti della gente del gruppo 2 è la stessa di quelli del gruppo 8 
Il segreto è sapere QUANDO c'è bisogno di farsi delle paranoie... :) |
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 12 marzo 2010 : 19:58:36
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| Totally agree |
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
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cami
Utente Junior
Città: roma
136 Messaggi |
Inserito il - 15 marzo 2010 : 10:37:00
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grazie!!! mi sento rincuorata...
Citazione:
Messaggio inserito da chick80
La cosa bella è che poi in generale la riproducibilità degli esperimenti della gente del gruppo 2 è la stessa di quelli del gruppo 8
sono convinta che seguendo questo principio (con il quale sono completamente d'accordo) la gente del gruppo 8 sarà inesorabilmente spinta ad una scalata verso il 2...
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angemore
Nuovo Arrivato
82 Messaggi |
Inserito il - 15 marzo 2010 : 11:23:47
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Mi è capitato di fare un corso per real time e abbiamo posto la stessa domanda al tecnico. Lui ci ha risposto che è possibile riciclare la piastra coprendo con la pellicola solo i pozzetti che stai usando e lasciando gli altri scoperti. Ovviamente come ti hanno già detto ciò aumenta di molto il rischio di contaminazione!
Che la piastra si potesse tagliare sinceramente non lo sapevo, io di solito quando ho pochi campioni uso delle Strip da 8 provette da 0,2 ml apposite per real time. Per chiudere esiste anche una "spatola" per evitare di sporcare il tappo con le dita e non permettere il corretto passaggio del raggio.
Ti mando il link per farti un'idea...considera che ce ne sono di varie ditte a vari prezzi.
https://products.appliedbiosystems.com/ab/en/US/adirect/ab?cmd=catProductDetail&productID=4316567&catID=602165&backButton=true
Ciao, buona giornata. |
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