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Pam
Nuovo Arrivato

Prov.: Roma
Citt�: roma

9 Messaggi

Inserito il - 31 marzo 2008 : 12:42:14

...ciao sono Pamela,ho eseguito il mio primo stripping ed ho qualche dubbio sulla riuscita....forse � stato gi� chiesto comunque...quando lo eseguo � normale che la soluzione (stripping solution della Pierce) non imbibisca completamente la membrana di PVDF?....

accetto consigli...
grazie mille

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 31 marzo 2008 : 13:10:51

Non ho mai usato la stripping solution della pierce quindi non ti saprei dire.

Comunque non � niente di complesso, la puoi fare benissimo tu... vedi:
http://www.molecularlab.it/protocolli/protocol.asp?id=27

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Ely86
Nuovo Arrivato

Citt�: milano

100 Messaggi

Inserito il - 05 febbraio 2011 : 17:40:31

Ciao ho visto ed eseguito anche in laboratorio questo metodo ma non capisco per il rilevamento siamo un macchinario detto"codac" (non so se si scrive cosi)che rileva l'intensita delle bande e da poi un valore.
Come funziona questo strumento e come si chiama?grazie

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 05 febbraio 2011 : 18:14:13

Immagino sia un densitometro.

PS: sar� mica Kodak (la marca)?

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SpemannOrganizer
Utente

Citt�: Los Angeles

955 Messaggi

Inserito il - 05 febbraio 2011 : 18:34:38

o chemidoc?

Ely86
Nuovo Arrivato

Citt�: milano

100 Messaggi

Inserito il - 07 febbraio 2011 : 08:23:14

OK grazie sar� un densitometro e allora la marca sar� Kodak scusate ma � la prima volta che sono in un laboratorio e sono confusa su tutto!!Percio determino la densit� delle bande o l'intensit�?
grazie!

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 07 febbraio 2011 : 08:56:53

Beh, dipende, puoi misurare le 2. Fai una rivelazione fluorescente/luminescente o sviluppi su lastra fotografica?

Nel primo caso misuri l'intensit� luminosa nel secondo caso la densit� della banda (quanto "ha annerito" la lastra fotografica)

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Ely86
Nuovo Arrivato

Citt�: milano

100 Messaggi

Inserito il - 07 febbraio 2011 : 20:50:14

Allora io prima faccio lo stripping alla mei metto anticorpo primario faccio i lavaggi poi metto anticorpo secondario faccio lavaggi e in fine metto la perossidasi di rafano e posiziono la membrana su un lucido(sai quei lucidi dove i prof scrivono sopra durante le lezioni)e appoggio il foglio sul macchinario e poi visualizzo l'immagine e tutte le bande,poi con un programma faccio dei qudrati intorno alle bande e il computer calcola un parametro detto netx intensity dopo mi fanno fare dei conti con excel..
percio io cosa calcolo l'intensit� delle bande?

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 08 febbraio 2011 : 22:56:50

Citazione:
posiziono la membrana su un lucido(sai quei lucidi dove i prof scrivono sopra durante le lezioni)

A meno che utilizziate qualche macchinario strano... quei "lucidi" sono in realt� lastre fotografiche!

Citazione:
percio io cosa calcolo l'intensit� delle bande?

No! Stai misurando la densit� delle bande. Le bande sono nere su una lastra trasparente, tu ne guardi la densit�, ovvero quanta luce ci passa attraverso. Meno luce passa pi� la banda � densa, pi� era forte il segnale che ha generato la banda.

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