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Cristina1989
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
47 Messaggi |
 Inserito il - 02 febbraio 2012 : 11:35:31
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Ciao ragazzi, sto studiando la tecnica ChIP immunoprecipitazione della cromatina ma non riesco ancora a interpretare i risultati.
Volevo allegarvi una foto per farvi capire meglio la domanda che sto per postarvi ma sono due giorni che il sito non me lo permette.
(Sto seriamente pensando che è il mio pc il problema XD )
Innanzitutto la quantità rilevata è quella dei geni considerati, giusto? ma perchè è poca quando non usiamo l'anticorpo??
Grazieee vorrei capireeeee!
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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Cristina1989
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
47 Messaggi |
Inserito il - 02 febbraio 2012 : 12:22:55
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Ieri ho provato ad allegare l'intero articolo, ma stamattina solo un'immagine selezionata con paint inserita in un file doc e...niente, non me la allega! ( ho provato anche con power point O_o )
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Cristina1989
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
47 Messaggi |
Inserito il - 02 febbraio 2012 : 12:25:52
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Immagine:
174,56 KB
oh! ci sono riuscitaaa T_T
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Moloney
Nuovo Arrivato
111 Messaggi |
Inserito il - 03 febbraio 2012 : 21:09:39
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Prima cosa: l'immagine sfonda il template della pagina...
In secondo luogo: la domanda è perchè senza anticorpo abbiamo poco amplificato in PCR (cosa che nella figura che hai postato non si vede, perchè è la 1A)? Se la domanda è questa, semplicemente perchè non hai IMMUNOprecipitato nulla senza ANTICORPO. |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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Cristina1989
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
47 Messaggi |
Inserito il - 04 febbraio 2012 : 11:16:07
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Grazie Moloney!! grazie chich80!!
Le figure sono 1A in alto a sinistra, 1B in alto a destra e 1C in basso.
Quindi in 1A sto vedendo DNA giusto?
Il diagramma bianco rappresenta il DNA a cui si è legato menin e quello grigio rappresenta il DNA legato a RNApII? o c'è altro che si denota dall'immagine??
Nell'articolo dice che si può notare una connessione tra menin e RNApII e lo dimostra anche la figura 2B ma...come hanno fatto a determinare questo dato??come si capisce questa cosa?
Ultima domanda, riguarda la figura 1C: mi aiutate a capirla??
-quello che vedo è un western blotting??
-le bande sono DNA? e sopratutto, è DNA che ha legato menin o ciò che c'è scritto a destra?
-perchè l'immunoprecipitazione di menin è stata fatta con anticorpi ANTI-menin??che senso ha?
Grazieeeee!!!!!!!!! |
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0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 04 febbraio 2012 : 13:23:01
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Citazione:
Messaggio inserito da Cristina1989
Ultima domanda, riguarda la figura 1C: mi aiutate a capirla??
-quello che vedo è un western blotting??
-le bande sono DNA? e sopratutto, è DNA che ha legato menin o ciò che c'è scritto a destra?
-perchè l'immunoprecipitazione di menin è stata fatta con anticorpi ANTI-menin??che senso ha?
Grazieeeee!!!!!!!!!
Poni domande dandoti già la risposta.
Es.:
Citazione:
quello che vedo è un western blotting
Si.
Citazione:
le bande sono DNA?
Se è un Western blot devono essere proteine, no?
Citazione:
è DNA che ha legato menin o ciò che c'è scritto a destra?
Leggendo la didascalia scopri che menin è stato immunoprecipitato con anticorpi anti-menin (e ciò ha senso. Lo scopo dell'esperimento è vedere chi lega menin: allora per prima cosa dovrai far si di poter legare menin). Assieme a menin è stato precipitato tutto quello che vi interagiva con sufficiente forza. Ora, di ciò che vi interagiva, su cosa si sono concentrati gli sperimentatori? Sulla RNApolII, in particolare sul suo CTD, su una sua forma fosforilata in posizione ser2 e su un'altra forma fosforilata, in posizione ser5. Per rilevare questi tre elementi, sono stati ovviamente usati tre anticorpi diversi. |
So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
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Cristina1989
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
47 Messaggi |
Inserito il - 05 febbraio 2012 : 19:49:50
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Grazie 0barra1, la tua risposta è stata importante, davvero.
Sto iniziando a capire e credo che dovrò imparare meglio il western blot, c'è tutto il protocollo sul forum?? perchè non riesco a capire se i due anticorpi sono inseriti nello stesso esperimento o in due tempi diversi... >_<
ps. ma quindi "anticorpi per menin" e "anticorpi anti-menin" è la stessa cosa ! |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 05 febbraio 2012 : 20:06:35
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Citazione:
perchè non riesco a capire se i due anticorpi sono inseriti nello stesso esperimento o in due tempi diversi
Metti il primario, lo lasci legare (es. overnight a 4 gradi) poi lavi l'eccesso di anticorpo, in modo da eliminare tutto il primario non legato alla proteina di interesse, poi metti il secondario (es. 2-3 ore a temp ambiente), lavi l'eccesso e procedi alla rilevazione.
Citazione:
ma quindi "anticorpi per menin" e "anticorpi anti-menin" è la stessa cosa !
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Cristina1989
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
47 Messaggi |
Inserito il - 07 febbraio 2012 : 20:55:36
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| Sempre meglio <3 Grazie!!!! |
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