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Tag   cloning lic ricombinazione gateway restrizione  Aggiungi Tag

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Autore Discussione  

Thermocycler
Nuovo Arrivato


Prov.: vr
Città: verona


14 Messaggi
Inserito il - 05 febbraio 2015 : 15:46:27  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Thermocycler Invia a Thermocycler un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Il mio dubbio riguarda i vantaggi o svantaggi delle tecniche di clonaggio in vettori.

Nella mia ancora breve esperienza in laboratorio ho sempre operato con enzimi di restrizione + ligasi per inserire un costrutto in vettore, ma non riesco a immaginare quali condizioni mi possano portare ad utilizzare altre tecniche come ta/topota, gateway systems o lic(ligation indipendent cloning).

qualcuno sa dirmi quali condizioni mi portano a scegliere una tecnica rispetto ad un'altra e perchè?

Geeko
Utente

Ctenophor1.0

Città: Milano


1043 Messaggi
Inserito il - 05 febbraio 2015 : 21:19:42  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Geeko Invia a Geeko un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ad esempio il clonaggio TA risulta molto utile quando il tuo inserto lo ottieni da una precedente amplificazione per PCR, mentre il sistema GATEWAY di solito si usa quando devi fare degli screening di inserti su larga scala e quindi portare avanti in parallelo magari dozzine o centinaia di clonaggi usando lo stesso sistema di trasferimento basato sulla ricombinazione del fago lambda.

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Thermocycler
Nuovo Arrivato


Prov.: vr
Città: verona


14 Messaggi
Inserito il - 06 febbraio 2015 : 11:18:02  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Thermocycler Invia a Thermocycler un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ok,quindi in ta sfruttando la sticky end con adenina mi salto il passaggio dei tagli, per forza no? Risparmio tempo e soldi di enzimi, e magari ho un passaggio di purificazione in meno da fare. Ma non rischio di portarmi dietro del background? voglio dire: il gioco vale la candela con questa tecnica?

Per quanto riguarda gateway, se ho da fare uno screening di una libreria genomica o di cDNA, non mi conviene comunque ligare gli inserti con degli adattatori e andare poi a montare il vettore? Cos'ha di più il gateway system che quest'altra tecnica non ha?

grazie per la risposta :)
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