ciao! avrei bisogno di aiuto! il mio tirocinio di laboratorio è consistito nel purificare e caratterizzare la fosfatasi alcalina di E.coli. alla fine di tutti gli esperimenti devo ovviamente trarre delle conclusioni. ho una cosa che pero nn mi è molto chiara: ho effettuato la cromatografia per esclusione molecolare e la SDS-PAGE per determinare la massa molecolare relativa della mia proteina rispettivamente in condizioni native e denaturanti ottenendo questi risultati: Mr nativa: 44.000 Mr denaturata:48.000. in bibliografia è stato trovato un valore in SDS gel di 43.000 +/- 2000. la mia domanda è: come posso commentare questi valori?? perchè la mia conclusione è stata molto semplicemente che i risultati sono piu o meno conformi ai dati della bibliografia, pero per la tesi questo non basta...per favore mi aiutate??????????? non riesco da sola a trarre delle conclusioni soddisfacenti :(
ciao! avrei bisogno di aiuto! il mio tirocinio di laboratorio è consistito nel purificare e caratterizzare la fosfatasi alcalina di E.coli. alla fine di tutti gli esperimenti devo ovviamente trarre delle conclusioni. ho una cosa che pero nn mi è molto chiara: ho effettuato la cromatografia per esclusione molecolare e la SDS-PAGE per determinare la massa molecolare relativa della mia proteina rispettivamente in condizioni native e denaturanti ottenendo questi risultati: Mr nativa: 44.000 Mr denaturata:48.000. in bibliografia è stato trovato un valore in SDS gel di 43.000 +/- 2000. la mia domanda è: come posso commentare questi valori?? perchè la mia conclusione è stata molto semplicemente che i risultati sono piu o meno conformi ai dati della bibliografia, pero per la tesi questo non basta...per favore mi aiutate??????????? non riesco da sola a trarre delle conclusioni soddisfacenti :(
44kd è in linea con 43 +/-2 kd non c'è molto da dire, ma 48? è forse una proteina dimerica? hai visto in letteratura?
effettivamente sarebbe un'ottima conclusione..:D..il problema è che in bibliografia ogni subunità è indicata come circa 40.000....:/!! teoricamente quindi sarebbe stato piu corretto avere 80000 che 48000 giusto? ... quindi la conclusione più ovvia è che ho sbagliato l'esperimento??:(
bè effettivamente hai ragione...meglio nn essere troppo ottimista...:)! si cmq ho fatto anche i saggi enzimatici.. sono arrivata alla conclusione che molto probabilmente la purificazione della proteina non è venuta in modo ottimale, come posso riscontare dal valore piuttosto basso del fattore di purificazione e della resa ottenuti in laboratorio rispetto ai dati bibliografici. penso quindi che sia possibile che oltre alla mia proteina mi sono tirata dentro altre sostanze, per questo ho un valore che mi indica la presenza di un'altra unità. secondo te è un ragionamento plausibile? :) ps grazie mille di avermi aiutata!!:)
bè effettivamente hai ragione...meglio nn essere troppo ottimista...:)! si cmq ho fatto anche i saggi enzimatici.. sono arrivata alla conclusione che molto probabilmente la purificazione della proteina non è venuta in modo ottimale, come posso riscontare dal valore piuttosto basso del fattore di purificazione e della resa ottenuti in laboratorio rispetto ai dati bibliografici. penso quindi che sia possibile che oltre alla mia proteina mi sono tirata dentro altre sostanze, per questo ho un valore che mi indica la presenza di un'altra unità. secondo te è un ragionamento plausibile? :) ps grazie mille di avermi aiutata!!:)
Secondo me è un ottimo ragionamento speculativo :D