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emi24
Nuovo Arrivato
40 Messaggi |
 Inserito il - 10 marzo 2011 : 10:50:07
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cioa a tutti,
qualcuno saprebbe dirmi le lunghezze d'onda di eccitazione ed emissione di BFP,GFP,CFP e YFP ?
Nel caso dei kit che sfruttano il principio della FRET per valutare la presenza di un enzima proteolitico in cellula o per valutare i livelli di calcio intracellulare, se si usa la coppia FRET GFP-BFP chi è il donatore fret e chi l'accettore fret?
vi ringrazio
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 10 marzo 2011 : 14:47:19
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Link molto utile per vedere gli spettri: http://www.invitrogen.com/site/us/en/home/support/Research-Tools/Fluorescence-SpectraViewer.html
Comunque i picchi sono:
GFP: ex: 488 nm (EGFP, quella usata più comunemente, la GFP wt è a 395nm) em: 509 nm
YFP: ex: 514 nm em: 527 nm
CFP: ex: 430 nm em: 476 nm (con un secondo picco a 502 nm)
BFP non sono sicuro, comunque è molto simile alla CFP
Citazione:
Nel caso dei kit che sfruttano il principio della FRET per valutare la presenza di un enzima proteolitico in cellula o per valutare i livelli di calcio intracellulare, se si usa la coppia FRET GFP-BFP chi è il donatore fret e chi l'accettore fret?
Il donatore FRET è SEMPRE il fluoroforo ad energia maggiore. Questo perchè per avere FRET l'emissione del donatore deve coincidere con l'eccitazione del ricevente. Siccome -almeno nell'eccitazione monofotonica- la lunghezza d'onda di eccitazione è minore di quella di emissione, la lunghezza d'onda di eccitazione del donatore sarà minore (e quindi ad energia maggiore) di quella del ricevente.
Quindi, in sostanza, BFP dona e GFP accetta! :) |
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emi24
Nuovo Arrivato
40 Messaggi |
Inserito il - 10 marzo 2011 : 16:16:26
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grazieeeeeeeee!
hai confermato le mie idee...un sicurezza in più per l'esame
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