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Discussione |
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giuseppe sberla
Nuovo Arrivato
Prov.: SICILIA
Città: SIRACUSA
43 Messaggi |
 Inserito il - 02 novembre 2010 : 20:24:42
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Qualcuno sa dirmi un buon protocollo per IF per colorare filamenti di vimentina ?
Grazie
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giuseppe sberla
Nuovo Arrivato
Prov.: SICILIA
Città: SIRACUSA
43 Messaggi |
Inserito il - 02 novembre 2010 : 23:24:31
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| anche un buon protocollo per IF standard ?! |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 03 novembre 2010 : 09:41:55
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| io faccio: fissazione in PFA4% per 10' a RT o in Metanolo freddo per 5' nel -20 (dipende dalle specifice dell'anticorpo). Poi, lavaggi in PBS, blocco di 20' con una soluzione di 0,5% BSA, o,1% saponin e 50mM NH4Cl. Poi procedo con l'Ab I diluito nella stessa soluzione di blocco, generalmente ON a 4°C; lavaggi e infine Ab II sempre 1:400 diluito in soluzione di blocco per 45'. Monto e via!!! |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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giuseppe sberla
Nuovo Arrivato
Prov.: SICILIA
Città: SIRACUSA
43 Messaggi |
Inserito il - 03 novembre 2010 : 11:58:36
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si grazie. potresti gentilmente scrivermi ogni passaggio del protocollo perchè lo devo studiare e così non ci capisco nulla. |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 03 novembre 2010 : 17:01:56
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| i passaggi sono esattamente quelli che ti ho elencato e sono già in ordine: 1 fissazione, 2 lavaggi, 3 blocking, 4 incubazione con l'ab I (non c'è bisogno di lavaggio prima), 5 lavaggi, 6 incubazione con l'ab secondario, 7 montaggio dei vetrini. |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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_pietro_
Nuovo Arrivato
Città: Lund
104 Messaggi |
Inserito il - 04 novembre 2010 : 11:30:24
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Citazione:
Messaggio inserito da Iside
i passaggi sono esattamente quelli che ti ho elencato e sono già in ordine: 1 fissazione, 2 lavaggi, 3 blocking, 4 incubazione con l'ab I (non c'è bisogno di lavaggio prima), 5 lavaggi, 6 incubazione con l'ab secondario, 7 montaggio dei vetrini.
Non lavi dopo il secondario? |
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