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supererry
Nuovo Arrivato

Prov.: Torino
Citt�: Torino

82 Messaggi

Inserito il - 02 agosto 2012 : 22:57:02

Ciao a tutti, sto provando a fare un immunofluorescenza su tessuto cerebrale con anticorpi anti SIRT2 e GSK3b, ma mi vengono molto fondose e difficilmente vedo le cellule nel tessuto.
Permeabilizzo con triton x-100 1% e inizialmente usavo un blocking con 10% NGS, 0,5% triton. Ora sto utilizzando un NGS 5% e 0,03% triton, ma il risultato non cambia.

Cosa mi consigliate? Sono tessuti fissati con PAF 4% e sezionati al criostato. ogni fetta e' spessa 30um.

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 03 agosto 2012 : 07:53:54

Prova a usare BSA per bloccare.
Puoi anche provare con del Sudan Black per rimuovere un po' di fondo.

Altrimenti non ti resta che cambiare fissativo e/o anticorpi...

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supererry
Nuovo Arrivato

Prov.: Torino
Citt�: Torino

82 Messaggi

Inserito il - 03 agosto 2012 : 14:40:40

pu� essere un'idea diluire ulteriormente l'anticorpo secondario?
di solito lo metto 1:1000