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teodora
Nuovo Arrivato
8 Messaggi |
 Inserito il - 02 ottobre 2009 : 09:52:34
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Salve a tutti!!
Ho un problema con la mia linea cellulare.. quando le piastro su vetrino tendono a formare gruppi abbastanza grandi.. La domanda č come posso avere un monostrato?
Grazie
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lą
Utente Junior
565 Messaggi |
Inserito il - 02 ottobre 2009 : 11:08:57
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quante ne piastri su un vetrino?
che linea cellulare usi? |
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Iside
Utente Attivo
Cittą: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 02 ottobre 2009 : 11:22:27
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| fai un coating? |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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teodora
Nuovo Arrivato
8 Messaggi |
Inserito il - 05 ottobre 2009 : 10:35:57
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Di solito ne piastro 60000 in 400 microlitri. Utilizzo una linea cellulare derivante da una fusione somatica di cellule ippocampali di topo e cellule di neuroblastoma murino. Ho provato ad utlizzare anche la polylisina.
Grazie |
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chick80
Moderatore
Cittą: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 05 ottobre 2009 : 10:48:08
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| Puoi provare con il collagene o qualche altro coating. Guarda anche in letteratura se c'č qualche indicazione |
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teodora
Nuovo Arrivato
8 Messaggi |
Inserito il - 05 ottobre 2009 : 11:05:10
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| grazie chick 80 ma non credo che cambiando coating posso risolvere... |
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GFPina
Moderatore
Cittą: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 05 ottobre 2009 : 11:29:36
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Citazione:
Messaggio inserito da teodora
grazie chick 80 ma non credo che cambiando coating posso risolvere...
Beh se non provi non lo saprai mai!
Ogni tipo di cellula č differente e perchč si attacchi bisogna che abbia un substrato il pił vicino possibile al suo naturale. Cellule che si attaccano bene con un coating di polylisina non č detto che lo facciano altrettanto bene con collagene e viceversa.
Attaccarsi sul vetro per le cellule č in genere molto difficile, quindi spesso č necessario un coating oppure al posto del vetro utilizzare supporti di plastica (con o senza coating, dipende dalle cellule)
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teodora
Nuovo Arrivato
8 Messaggi |
Inserito il - 05 ottobre 2009 : 11:56:10
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| grazie proverņ e vi farņ sapere... |
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chick80
Moderatore
Cittą: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 05 ottobre 2009 : 15:09:01
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Infatti, te lo dico per esperienza personale, ho avuto cellule che non aderivano alla polilisina ma aderivano al collagene.
Non so dirti con certezza se nel tuo caso funzionerą ma vale la pena provare. |
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plof
Nuovo Arrivato
13 Messaggi |
Inserito il - 05 ottobre 2009 : 16:33:18
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...
Oltre a provare diversi coating, se le cellule si aggregano in sospensione e poi crescono a chiazze, prova a distribuirle in un volume piu' piccolo (0,1-0,2 ml per pozzetto di 8 chamber slide: http://www.emsdiasum.com/microscopy/products/preparation/chamber.aspx) e poi aggiungi il resto del terreno, ma con delicatezza, dopo che sono sedimentate.
Fai sapere se funge! |
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teodora
Nuovo Arrivato
8 Messaggi |
Inserito il - 07 ottobre 2009 : 09:14:41
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| Ciao a tutti !!Mi sono procurata il collagene ma non l'ho ancora provato..Mi potreste indicare un protocollo ? |
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teodora
Nuovo Arrivato
8 Messaggi |
Inserito il - 08 ottobre 2009 : 16:06:33
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Protocollo procurato..ho provato il collagene e le cellule sono aderenti e non hanno formato i famosi "gruppetti"..ora le trasfetto e spero che restino aderenti...
Grazie a tutti
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