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roselady
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: napoli
119 Messaggi |
 Inserito il - 06 aprile 2013 : 11:47:40
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Ciao ragazzi,approfitto della vostra disponibilità costante per risolvere con voi due dubbi che ho sul piastramento di cellule .
Si devono piastrare cellule umane su una multiwell da 96 pozzetti , i pozzetti da usare sono 72 .
Si piastrano 100 000 cellule per pozzetto in 50 microlitri.
Ho fatto questo calcolo insieme alladottoranda :
100000 cell: 50 microlitri= x :1000 microlitri (1 ml)
x=2000 000 cellule in un ml
Ho staccato e contato le cellule,che in totale sono 7200 000
Per sapere in quanti ml devo risospendere le cellule dopo averle pellettate per averle a quella concentrazione devo fare :
cell tot / concentrazione (per ml) ----> 7200000/2000000= 3,6 ml
3,6 ml sono proprio gli ml che servono giusto giusto per coprire 72 pozzetti con 50 microlitri di cellule in ognuno ( 50* 72 = 3600=3,6 ml) , la dottoranda decide di risospendere il pellet in 3,8 ml per sicurezza dicendo che in tal caso si piastreranno non piu 100000 cellule per pozzetto ma 95000,un po meno,appunto per si è aumentato un po il volume di risospensione .
Ora vorrei sapere come si fa il calcolo per sapere che piastro 95000 cellule e non 100000
Io ho fatto cosi :
7200000 cell tot /3,8 ml = 1'894 736 cell/ml
e poi :
1'894 736: 3800 microlitri= x : 50 microlitri
x= 24930 cell e non 95000...sapete dirmi come si fa?
Il secondo quesito è simile ma non vorrei sapere le cellule,vorrei sapere gli ml da risospendere nel pellet.
si piastrano 15000 cellule per pozzetto ( stavolta in 100 microlitri ),quindi ho 150000 cellule per ml .
Conto 1900000 cellule totali .
Come nel ragionamento precedente faccio :
1900000/150000= circa 13 ml che sono troppi per risospendere il pellet cellulare,sarebbe uno spreco.
La ragazza decide di risospendere in 2,6 ml il pellet direttamente.. voi sapete dirmi perchè?
Ho calcolato che mi servono 24 pozzetti,in ognuno vanno 100 microlitri,quindi ho bisogno di 2,4 ml totali di cellile e 360000 celluletotali .
Io ho pensato che abbia fatto questo calcolo per una doppia diluizione :
considera 5 ml ,in 5 ml ci sono 750000 cellule ,quindi :
1900000/750000= 2,6 ml circa.
In tal caso risospenderei il pellet in 5 ml ,da qui prelevo 1 ml e lo metto in 1,6 ml di terreno pulito in una nuova falcon .
La ragazza però ha risospeso direttamente il pellet in 2,6 ml...come mai secondo voi?
Grazie mille a chi mi risponderà,so che ho scritto un poema ma vorrei cercare di risolverequesti dubbi in modo da capire per bene come destreggiarmi :(
grazie :)
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