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fabio
Nuovo Arrivato
29 Messaggi |
 Inserito il - 14 dicembre 2005 : 11:47:57
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ho dei problemi nell'estrazione dell'Rna da cervello. Potete per cortesia darmi un protocollo valido per questo tessuto?
Grazie
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valia
Moderatore
Prov.: UK
1001 Messaggi |
Inserito il - 14 dicembre 2005 : 14:07:32
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Io ho estratto RNA, ma da TESTE di drosophila e altre bestiole.. non ho isolato il cervello!!
Ho tagliato le teste ( )e le ho ridotte in polvere in un pestum, il tutto in ghiaccio secco altrimenti l'RNA si degrada.. i campioni devono restare sempre congelati!
E poi ho proseguito con un normale protocollo.. usando TRIzol.
Ma di che bestie si tratta? Se non sono troppo grandi penso tu possa provare cosi', senza isolare il cervello..
Che tipo di problemi hai avuto? Guarda, comunque ti capisco benissimo..lavorare con l'RNA e' difficilissimo, perche' anche a guardarlo si degrada!!!
Facci sapere dai.. Ciao ciao
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fabio
Nuovo Arrivato
29 Messaggi |
Inserito il - 14 dicembre 2005 : 15:16:26
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| Si tratta di cervello di ratto.I campioni sono in Rna Later. Quando faccio la precipitazione sodio acetato etanolo la soluzione diventa torbida, cosa devo fare? |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 14 dicembre 2005 : 20:29:43
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Io ho usato sia il Trizol sia la classica estrazione fenolo/cloroformio.
Con i ratti di solito sonicavo i campioni, con i topi invece li disgrego a mano con un pestello.
Non e' che hai qualche residuo di proteine? Prova a estrarre i campioni piu volte prima di precipitarli, magari puo essere utile.
Sinceramente non ho mai usato RNA Later (non ho neanche idea di cosa sia... una soluzione x preservare i campioni?) io di solito metto i campioni su ghiaccio secco ASAP e poi nel -80. |
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cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
558 Messaggi |
Inserito il - 16 dicembre 2005 : 14:25:01
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Noi estraiamo RNA da tutti i tessuti di topo e di ratto, solitamente al momento del prelievo li mettiamo direttamente in azoto, ma ci è capitato di dover estrarre del tessuto adiposo (nostro cavallo di battaglia anche per l'uomo), quindi simile al cervello, che era stato messo in RNA later e lo abbiamo preso e messo ( solo il pezzo) in Qiazol, quindi potterizzato (omogenato) ed infine estratto con le colonnine della Qiagen : KIT MINI LIPID. Anche il Qiazol è della Qiagen.
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Phoenix
Nuovo Arrivato
Prov.: Milano
Città: Bollate
17 Messaggi |
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valia
Moderatore
Prov.: UK
1001 Messaggi |
Inserito il - 27 dicembre 2005 : 16:58:59
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Senti senti quanti kit!
Peccato... a me non lasciano usare i kit nemmeno per la mini prep!
Forse sotto sotto è meglio pero'.. a mano ci si mette piu' tempo ma sicuramente costa meno e (in teoria), si ha un'idea piu' chiara di quello che si sta facendo! No?
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estrazione RNA da 
Didattica e Relazioni
