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DanioRerio
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 Inserito il - 21 aprile 2017 : 18:31:26
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 Scritto da MolecularLab Mobile
Salve a tutti, oggi per una genotipizzazione ho proceduto alla corsa su gel di agarosio di 4 campioni (precedentemente sottoposti a PCR) e un marker 1Kbp. Nel caricamento non ho bucato i pozzetti e i campioni (12 uL DNA + 2uL colorante) si sono disposti correttamente. Finito il tempo della corsa, il colorante aggiunto ai campioni era scomparso. Le condizioni dell' esperimento erano le seguenti:
Gel di agarosio 2%
TAE 0,5x
100V
30min di corsa
Inoltre ho utilizzato una macchina per la corsa a polarità fissa, per cui è escluso che il DNA abbia corso in direzione sbagliata.
Finita la corsa ho comunque tentato una colorazione con EtBr (10min). Con UV l' unica cosa che riuscivo a vedere era una sbiaditissima banda di marker 1Kbp, disposta leggermente sotto al pozzetto.
Nessuna corsa aveva mai dato questi risultati e soprattutto non riesco a capire dove ho sbagliato.
Ultima considerazione: questa corsa l'ho fatta nello stesso Buffer TAE che ho usato per un'altra corsa subito prima. Quest'ultima però è venuta bene.
Qualcuno può spiegarmi cosa potrebbe essere successo? Questa cosa mi attanaglia. Grazie!
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