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ingrid iotova
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 Inserito il - 18 ottobre 2009 : 13:52:21
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Ciao a Tutti...sono nuova del gruppo...ho sempre esitato, perchè non so come si usano questi strumenti...spero qualcuno possa darmi una mano...
Devo risolvere questi esercizi in preparazione all'esame di martedì...l'ultimo in particolare mi sta uccidendo...le ho provate tutte, ma niente da fare.
Devo sostanzialmente capire se il mio ragionamento va bene, ma mi perdo...usando klenow devo rendere compatibili le estremità dei filamenti digeriti per tagli successivi con enzimi che altrimenti non potrebbero tagliare (Eco RV) il tutto per mettere i due segmenti di DNA nello stesso vettore, con le dovute cautele dato che uno ciascuno portano seq riconosciute da due enzimi che li taglierebbero...è un gioco di puzzle e di vista, lo so, ma mi sto demoralizzando.
Non riesco ad allegare il cmpito, non capisco perchè, quindi provo a scrivere l'esercizio:
Inserire nel vettore circolare che porta due siti, uno per HindIII e uno per Pst1,(in ordine orario sul vettore circolare, si incontra prima Hind e poi Pst a piccola distanza) i due seguenti filamenti di DNA precedentemente clonati in due differenti plasmidi:
plasmide 1: in sequenza oraria, porta siti per HindIII, BamHI, Smal ePstI (considerate l'anello richiuso a livello di PstI, mentre il gene di interesse è compreso tra Hind e Smal (quindi BamHI si trova in mezzo)
plasmide 2: come prima: EcorI, PstI e BamHI ( considerate l'anello richiusto su BamHI) il gene di interesse è compreso tra EcoRI e BamHI, quindi PstI è in mezzo...
Si possono usare SOLO: gli enzimi BamHI, EcoRI, EcoRV, SmaI, PstI e HIndIII, insieme a ligasi e pol Klenow...
Confido nella testa più lucida della mia, di qualcuno che ne sa!!
Grazie mille...
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