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vello89
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 Inserito il - 10 luglio 2012 : 12:12:10
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Salve!
Sto studiando un articolo per la prova finale della triennale di biotecnologie.
Ho però un dubbio su un risultato di un western..
Brevemente vi spiego il tutto!
L'articolo parla delle nanoparticelle di oro e sono andati a vedere, tra le varie cose, qual è il motivo vero per cui queste nanoparticelle di oro inducono accumulo di autofagosomi.
In primis le nanoparticelle di oro, e altri, sono state classificate come induttori di autofagia, poichè appunto inducono accumulo di autofagosomi.
Ora gli autofagosomi ,però, possono accumularsi o per induzione di autofagia o come conseguenza del blocco del flusso autofagico (non c'è più la formazione dell'autofagolisosoma), quindi si è andati a monitorare la formazione del marker della membrana autofagica quale LC3-II (che deriva da LC3-I , forma citosolica). Sapendo che LC3-II è poi normalmente degradato nel lisosoma stesso, la quantità totale di lc3-II dipende dal bilancio tra la sua formazione e degradazione. Questo non è vero se invece abbiamo danneggiamento della degradazione lisosomiale(non c'è più autofagolisosoma) e la quantità totale dipende strettamente dalla sua produzione. Quindi monitorando la quantità totale di LC3-II in presenza e assenza di inibitore della degradazione lisosomiale, si può determinare se di fatto l'autofagia è indotta oppure no.
L'esperimento è stato condotto usando cellule trattate con: starvation ( induce autofagia e provoca accumulo di autofagosomi, quindi LC3-II si accumula e il rapporto di LC3-II su LC3-I è elevato), usando clorochina(inibitore lisosomiale che induce di nuovo accumulo di lc3-II ) e nanoparticelle di oro di 50 nm (di nuovo c'è aumento di LC3-II).
Fin qui tutto chiaro..
Ora, il risultato chiave che gli ha permesso di capire che le nanoparticelle di oro non inducono autofagia, ma bensì bloccano il flusso autofagico, è stato il cotrattamento delle cellule con clorochina e nanoparticelle di oro in cui NON c'è incremento di LC3-II ad indicare quindi che le nanoparticelle non inducono autofagia.
Ora mi chiedo…. ma se sia clorochina che nanoparticelle da sole inducono un aumento di LC3-II (poichè agiscono entrambi sul blocco del flusso autofagico) perchè insieme invece lc3-ii non aumenta??
come hanno fatto a capire da questo risultato che quindi le nanoparticelle di oro non inducono l'autofagia???
Non so se sono stata chiara, ma spero in qualche delucidazione!!
Vi allego la foto dei risultati!!
Grazie in anticipO!
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dubbio risultato western (auto
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