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Lannister
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5 Messaggi |
 Inserito il - 06 luglio 2015 : 09:31:02
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Ciao a tutti! Sapreste spiegarmi perché l'HPLC è più sensibile delle altre cromatografie? Immagino che dipenda dal rilevatore associato, ma vorrei essere sicura. Con "sensibile" si intende in grado di individuare la presenza di quantità minime di campione, dico bene?
Grazie!
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DaniC
Nuovo Arrivato
8 Messaggi |
Inserito il - 08 luglio 2015 : 14:12:39
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Le cromatografie sono tecniche separative quindi quanto più la cromatografia riesce a discriminare le varie specie molecolari presenti un campione tanto più è sensibile
L'HPLC viene utilizzata anche in diagnostica molecolare per discriminare una sequenza di DNA wild type da una sequenza che ha anche solo una variazione nucleotidica (mutazioni puntiformi, polimorfismi)
La sensibilità dipende dal rivelatore, i più sensibili sono quello ad assorbanza e quello s luorescenza |
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DaniC
Nuovo Arrivato
8 Messaggi |
Inserito il - 08 luglio 2015 : 14:23:45
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Citazione:
L'alta risoluzione rispetto le normali tecniche sta nel fatto che:
1)lavori comunque in fase liquida e perciò non hai il problema come nella gas cromatografia dove hai un'alta risoluzione, ma devi mandare il preparato in fase gassosa e lo perdi.La risoluzione dell'HPLC sta sui 50.000-70.000 piatti teorici.
2)la velocità di flusso con cui applichi il campione è più elevata rispetto le normali cromatografie(esclusione molecolare, interazione idrofobica, etc) se non ricordo male la velocità di flusso è intorno a 0,5 ml al sec, mentre per le altre tecniche non puoi superare gli o,3-0,4 ml al min sennò rischi che la tua fase fissa si rovini.
3)all'interno della colonna cromatografica vi è la tua fase fissa, ora la risoluzione aumenta notevolmente a seconda della fase fissa che metti e della grandezza delle sue particelle. Ricorda che le particelle costituiscono la tua fase fissa e in relazione a quanto detto prima è ovvio che caricando con una certa velocità di flusso ed essendoci le particelle dentro si viene a sviluppare una certa pressione...ecco il perchè della struttura completamente sigillata e controllata da valvole.
4)come per una qualsiasi tecnica cromatografica il tampone può aiutare la separazione della miscela di analiti, il tampone lo puoi applicare:
senza gradiente, con gradiente "manuale"ossia controllato da te oppure tramite software particolari. |
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