selezionare cellula trasfettate stabilmente in mammiferi

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m.ari
Nuovo Arrivato

Prov.: Livorno

47 Messaggi

Inserito il - 21 luglio 2010 : 10:51:08

una domanda:
è possibile distinguere cellule trasfettate stabilmente da quelle trasfettate ma in cui non è avvenuta integrazione, se non è prevista ricombinazione omologa? (e quindi non possibile usare nè il metodo pos-neg con gentacna+ganciclovir, nè selezionare tramte pcr)?

Sicuramente è una domanda idiota (penso anche che la risp sia no...), però nelle slides della prof non è molto chiaro... :(

grazie!

Patrizio
Moderatore

Città: Barcellona

1915 Messaggi

Inserito il - 21 luglio 2010 : 11:09:59

con una PCR inversa ci riesci

m.ari
Nuovo Arrivato

Prov.: Livorno

47 Messaggi

Inserito il - 21 luglio 2010 : 11:11:52

come?
mi amplifica anche i messaggeri dei vettori non integrati... no?

Patrizio
Moderatore

Città: Barcellona

1915 Messaggi

Inserito il - 21 luglio 2010 : 11:18:24

non centra nulla il trascritto, prova a cercare questa metodica, credo sia l unico modo per vedere se c'e' stata l integrazione, un altro metodo potrebbe essere quello di isolari i singoli cloni piastrarli in modo da far crescere colonie separatamente, quelle che resitono avranno integrato il plasmide ma ovviamente, impiegheresti più tempo