microscopio a fluorescenza: rumore di fondo

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kiko6361
Nuovo Arrivato

Citt�: Verona

37 Messaggi

Inserito il - 17 dicembre 2010 : 11:45:59

Ciao a tutti,

volevo un consiglio in quanto da questa settimana nei miei esperimenti su cellule con una slow dye fluorescente(disbac)al microscopio ho un rumore di fondo altissimo.

Per cercare di risolvere il problema ho gi� rifatto tutte le soluzioni, cambiato lo stock della sonda, cambiato i terreni che utilizzo per le cellule, cambiata la lampada del microscopio, pulito l'obiettivo...). Ormai non so pi� a cosa pensare.

In teoria questa sonda si accende solo quando penetra nella cellula come conseguenza ad una depolarizzazione di membrana (� una sonda voltaggio-dipendente).

Avete per caso qualche suggerimento da darmi? Non trovo la soluzione a questo alto background?

Grazie a tutti per gli eventuali suggerimenti e buona gg

kiko6361
Nuovo Arrivato

Citt�: Verona

37 Messaggi

Inserito il - 21 dicembre 2010 : 12:12:42

Ciao...di nuovo io e forse con una illuminazione sul mio problema che cerca conferme.
In questa settimana con alto rumore di fondo ho fatto una modifica nella preparazione delle cellule (sono monociti da paziente), ossia ho utilizzato plasma autologo nel terreno, al posto di FBS al 10%. Io per� non ho scomplementato il plasma autologo. Secondo voi...pu� questa "miglioria" attivare il complemento e dare un problema in fluorescenza?
Grazie per chi mi sa consigliare