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Inserito il - 23 gennaio 2014 : 19:54:58

Salve a tutti!
Scusate se vi disturbo ma devo chiedervi aiuto per un dubbio che mi � sorto.
Sicuramente � la stanchezza da studio ma sono incappato in un paragrafo che mi sta mandando fuori di testa riguardante il TEST DEI CANALI hERG tramite Fluorescence-Polarization Assay.

Da quello che ho capito io uso un kit in cui c'� una porzione di mebrana con i canali hERG e un ligando rappresentato da una molecola capace di legarsi a tali recettori marcata con un fluoroforo.
Uso ora una luce polarizzata che colpisce il fluororo il quale, a sua volta, emana una radiazione avente lo stesso piano di polarizzazione della luce incidente. Ci� � dovuto al fatto che essendo il ligando attaccato al canale hERG esso non pu� ruotare liberamentee.

Introducendo il mio FARMACO da testare, se esso si lega ai canali hERG, esso andr� a scalzare il ligando marcato che si verr� perci� a trovare in soluzione; in questa situazione la molecola marcata (ligando+fluoroforo) potr� ruotare liberamente e perci� anche il piano della luce subir� delle rotazioni.

La rilevazione perci� viene fatta con un polarimetro che mi permette di valutare la ruotazione del piano della luce, giusto? Ma perch� viene utilizzato un marcatore fluorescente?

"Non � mai tardi per tentar l'ignoto. Non � mai tardi per andar oltre."
Gabriele D'Annunzio

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45 Messaggi

Inserito il - 23 gennaio 2014 : 20:15:59

Mi mancava una cosa estremamente importante e cio� il principio secondo cui:

le molecole fluorescenti in soluzione, se eccitate con luce polarizzata emettono luce nello stesso piano a condizione che durante l�eccitazione il fluoroforo resti in �stato stazionario�

Questo � quanto accade nel caso il cui il mio tracciante fornito con il kit, rimane legato alla proteina hERG.

Emetteranno luce in un piano differente se le molecole dovessero ruotare durante l�eccitazione del fluoroforo

Questo � quanto accade quando il mio tracciante � stato scalzato dai recettori hERG dal farmaco che ha capacit� di legare i suddetti canali.
In poche parole, essendo meno in soluzione il tracciante pu� ruotare e quindi ruota anche il piano della luce polarizzata (MINORE POLARIZZAZIONE)

Giusto?

P.S.: le parti in neretto sono state trovate in un sito internet che tratta l'argomento anche se in modo rapido.

Grazie ancora a tutti

"Non � mai tardi per tentar l'ignoto. Non � mai tardi per andar oltre."
Gabriele D'Annunzio

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