actinomicina e tubulina

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biomol
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65 Messaggi

Inserito il - 22 giugno 2009 : 13:21:06

ciao ragazzi,
ho un problema concettuale. sto facendo degli esperimenti di western blotting per capire se l'actinomicina D influenza l'espressione della mia proteina. Il mio capo mi ha detto di fare un controllo con fos o tubulina per capire se l'actinomicina sta funzionando...non capisco perch�?e cosa si aspetta?cio� per westwrn blotting dovrei vedere una diminuizione di tubulina o fos in seguito al trattamento con actinomicina?
aiutatemi per favore sto impazzendo..

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 22 giugno 2009 : 14:34:13

No semplicemente intende un controllo (housekeeping) per calibrare la quantit� di proteina.
Tubulina non dovrebbe essere affetta dal trattamento e quindi dovresti avere una banda uguale in tutti i campioni mentre della proteina che stai studiando se funziona il trattamento dovresti avere una diminuzione. In questo modo puoi dire che la quantit� di proteine totali seminate � la stessa, ma la tua proteina � diminuita.
Se hai una diminuzione anche della banda di tubulina allora pu� essere che hai caricato meno proteine in quel campione e quindi la diminuzione che vedi della tua proteina non � reale.