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lora
Nuovo Arrivato
52 Messaggi |
 Inserito il - 05 novembre 2008 : 09:43:21
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Quante cellule devo seminare nei pozzetti di una piastra a 96 per poi testare mediante MTT diverse dosi di INFbeta e TSH? Grazie.....
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6941 Messaggi |
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lora
Nuovo Arrivato
52 Messaggi |
Inserito il - 05 novembre 2008 : 12:12:37
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| Sono cellule tiroidee. Si contano quando arrivano a circa l'80% della confluenza. Io però non le ho ancora contate. In pratica ne dovrei seminare 5*104 (almeno da quanto dice un lavoro precedentemente scritto dal proff...). E' il primo esperimento che faccio non ho mai fatto colture cellulari, nè l'MTT....Le cellule sono cresciute e per ora ho visto con il dosaggio della tireoglobulina che non si sono sdifferenziate in fibroblasti.Se qualcuno mi può aiutare sarei molto contenta...PS: c'è un criterio per sapere QUANTE ne devo seminare?Il pezzo di tiroide mi è arrivato il 17 di settembre e ora sono al secondo passaggio. Le ho coltivate nelle T25. |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 05 novembre 2008 : 14:24:01
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io una tabella del genere l'avevo, ma non l'ho mai consultata. in realtà penso che il criterio del n° di cellule da piastrare dipenda da troppe cose per fare una standardizzazione. come ti diceva giuliano, molto dipende dalla confluenza che serve a te. se sai che l'esperimento va fatto con cellule all'80% di confluenza, prova a splittare in varie diluizioni e vedi quale piastra ti arriva prima. a quel punto potrai dire che dopo x giorni una y diluizione arriva alla confluenza che serve a te. quando poi imparerai a conoscere meglio la tua linea ti renderai automaticamente conto della velocità di crescita e potrai fare i tuoi calcoli.
quando dici "si contano quando arrivano a circa l'80% di confluenza" cos'è ch eintendi esattamente?
la confluenza la valuti al microscopio, se le stacchi e poi le conti hai il numero esatto di cellule ma non la confluenza perchè quella la stabilisci in base alla superficie di crescita.
prova a piastrarne 5x10*4 e vedi dopo quanto arrivano all'80% |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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lora
Nuovo Arrivato
52 Messaggi |
Inserito il - 05 novembre 2008 : 14:45:46
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| grazie per ora....siete stati molto gentili...potresti per favore farmi un esempio di questi CALCOLI?(PS: mi hanno detto che quando la confluenza arriva circa all'80% è meglio passare le cellule altrimenti si rischia che la coltura poi non sia più buona...qiundi quando la piastra è quasi piena è bene fare il trasferimento in altre piastre) |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 06 novembre 2008 : 10:49:33
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ma che intendi per esempio di questi calcoli??
allora, hai una piastra, questa ti è arrivata all'80% di confluenza e lo sai perchè l'hai vista al microscopio. (nb non è che la piastra non è + buona se supera l'80% di confluenza, ma il fatto è che le cellule troppo confluenti smettono di crescere perchè risentono di inbizione da contatto e in molti caso cominciano a differenziarsi, quindi la giusta confluenza dipende dal tipo di cellule e da quello che ci devi fare). quindi che fai? usi la tripsina e te le stacchi. prima di centrifugare te ne prendi qualche microlitro e fai la conta cellulare con la camera di burker.
a questo punto sai esattamente quante cellule hai staccato, ne prendi il volume che ti serve e le metti in coltura di nuovo. cosa non è chiaro riguardo i calcoli? quelli per la camera di burker? |
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lora
Nuovo Arrivato
52 Messaggi |
Inserito il - 06 novembre 2008 : 14:11:34
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| Ok ti ringrazio per l'aiuto che mi hai dato....Per quanto riguarda la conta mi potresti dire il procedimento? (così lo confronto con ciò che mi è stato detto in un'altra occasione)Grazie!Ciao ciao |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 06 novembre 2008 : 14:55:08
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conta cellule con camera di Burker. se usi la funzione "cerca" trovi un sacco di topic già aperti a riguardo.
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