Problemi con colture cellulari SH-SY

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buccia83
Nuovo Arrivato

2 Messaggi

Inserito il - 05 novembre 2008 : 15:29:38

Ciao a tutti!
Io sto coltivando la linea cellulare di neuroblastoma SH-SY (linea che cresce aderendo alla superficie delle fiasche) da 2 settimane. 2 settimane in cui ho avuto mille problemi. Luned�, giorno in cui dovevo riespandere la coltura, ho trovato tutte le cellule morte, ma ho pensato fosse dovuto ad un problema di confluenza in quanto mi � stato detto in seguito che questa linea va espansa quando si trova tra il 50% e il 75% della confluenza. Allora ne ho scongelate altre ma oggi, mentre le osservavo al microscopio confocale, ho notato dei puntini neri (che per la verit� avevo gi� osservato anche la settimana scorsa), alcuni dei quali si muovevano anche. Subito ho capito che si trattava di contaminazione. Potrebbe essere pi� un fattore collegato al terreno di coltura oppure � l'incubatore che � contaminato? Cosa devo fare se l'incubatore � contaminato?
Aggiungo che l'incubatore aveva gi� avuto problemi di contaminazione a Settembre ma dopo una rapida pulizia sembrava aver ripreso a funzionare correttamente.
Vi ringrazio tutti per le eventuali risposte.

nyo84
Utente Junior

Prov.: Brescia
Citt�: Piancogno

239 Messaggi

Inserito il - 06 novembre 2008 : 21:55:14

beh..il terreno puoi vedere se � contaminato..se l'incubatore � contaminato bisogna sterilizzarlo..� successo anche a noi..altra possibilit� �: non � che le cellule sono state congelate gi� contaminate??

Fai attenzione quando leggi libri di medicina..potresti morire per un
errore di stampa...

elly_
Utente Junior

400 Messaggi

Inserito il - 07 novembre 2008 : 13:15:36

se proprio vuoi salvare la tua coltura anche se non gli fa tanto bene potresti aumentare un po' la concentrazione di antibiotico nel terreno fino a quando la contaminazione se ne va per poi ritornare alla solita concentrazione. magari funziona...
poi se chiudi la flask in teoria anche se l'incubatore e' contaminato non dovresti avere contaminazioni perche' l'incubatore non e' sterile.

alessio83
Nuovo Arrivato

4 Messaggi

Inserito il - 29 marzo 2010 : 18:28:26

salve a tutti!!
qualcuno conosce il protocollo per il differenziamento delle SH-SY5Y??
so che molti usano l'acido retinoico con o senza BDNF....vorrei sapere in che quantit� e per quanti giorni...in letteratura non c'� molta chiarezza...non ho ancora capito se l'acido retinoico usato � quello tutto trans o 4-cis...
spero che qualcuno mi possa essere d'aiuto

mattia.dinunzio
Nuovo Arrivato

116 Messaggi

Inserito il - 30 marzo 2010 : 08:43:17

Alessio83, devi aprire un nuovo post per la tua domanda. Qui si sta gia parlando di qualcos'altro.

per la contamizione direi che questo � un bel problema. Oltre alla linea o all'incubatore ricorda che ci possono essere problemi alla cappa biologica. Dovresti farla controllare (filtro Hepa in primis). pPer escludere la contaminzazione nella linea prova a mettere in una piastra del terreno nuovo e poi metti in incubatore. Se anche li si formano le contaminazioni allora molto probabilmente hai cappa/incubatori contaminati.

ciao